聚丙酰胺凝胶电泳法分离丙种球蛋白.pptVIP

聚丙酰胺凝胶电泳法分离丙球蛋白;目录;简介; 聚丙烯酰氨凝胶电泳是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术。聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成，聚合过程由自由基催化完成。催化聚合的常用方法有两种：化学聚合法和光聚合法。化学聚合以过硫酸铵（AP）为催化剂，以四甲基乙二胺（TEMED）为加速剂。在聚合过程中，TEMED催化过硫酸铵产生自由基，后者引发丙烯酰胺单体聚合，同时甲叉双丙烯酰胺与丙烯酰胺链间产生甲叉键交联，从而形成三维网状结???。 ;聚丙烯酰胺凝胶的特性;影响电泳速度的因素;盘状电泳;实训原理;材料与仪器;3. 染色液： 0.05%氨基黑10B溶于7%醋酸溶液，或者用灵敏度高5倍考马斯亮蓝R250溶液染色。 4. 脱色液：7%醋酸溶液。 5. 电极缓冲液（pH8.3甘氨酸-Tris缓冲液）：甘氨酸28.8g，Tris0.6g加水定容至1000ml. 6. 示踪剂：0.01%溴酚蓝溶液 ;;操作步骤;2.安装胶管 把玻璃管下端得橡皮冒除去（拔时用力不要过猛，以防使胶条受损），将胶管安装在电泳仪上。 注意垂直，并要紧密，防止缓冲液从上槽漏下。 先向各胶管中加满电极缓冲液，不要有气泡留存，在向下槽注入缓冲液，然后将胶管下降至下槽缓冲液内。 3.加样 0.5ml新鲜血清，用5ml20%蔗糖溴酚蓝溶液稀释 。用微量注射器或移液枪向胶管内加20ul样品液，注意微量注射器或移液枪头要插入胶管内加液。;4.电泳 上槽连接负极，下槽连接正极，然后通电，先每管电流3mA电泳，当示踪剂进入分离胶时，电流增至每管5mA。 当示踪剂移至胶管下端1cm处时，关闭电源，取出胶管。电泳大约2-3小时。 5.剥胶 取一只带长针头的注射器，灌满水，将针头从浓缩胶的一端小心的管壁与凝胶之间，转动胶管，并同时推动注射器，在针头向前推动时，注入蒸馏水，使胶条随水的压力及润滑作用从玻璃管中脱离。 ;6.染色及洗脱 1).将取下的胶条放入12.5%三氯醋酸中固定10min，用1%考马斯亮蓝水溶液染色15min，7%醋酸过夜保存。 2).将取下的胶条放入7%三氯醋酸中固定10min，用氨基黑10B染色15min，7%醋酸浸泡过夜。 注:染液回收。 7.观察绘图 将脱色胶条取出放于滤纸上，观察分离色带，将结果绘于实验报告纸上。 ;注意事项;谢谢观赏