EGFP在大肠杆菌E.coli中的表达与检测.ppt

EGFP在E.coli中的表达与检测 3组 contents 第几章 一、背景介绍 1、绿色荧光蛋白（GFP） 2、质粒 3、大肠杆菌表达载体及表达系统 4、SDS原理及蛋白分离与检测 一 1 - 绿色荧光蛋白 1.1 发现 下村修 马丁-查尔菲 钱学健 发现GFP 发光的遗传标签 科研 一 1 - 绿色荧光蛋白（GFP） 1.1 发现 GFP 的分子质量为26 kDa，晶体结构如左图所示。蛋白质中央是一个圆柱形水桶样结构， 长420 nm，宽240 nm，由11 个围绕中心α螺旋的反平行β折叠组成，荧光基团的形成就是从该螺旋开始，桶的顶部由3 个短的垂直片段覆盖，底部由一个短的垂直片段覆盖，对荧光活性很重要的生色团则位于大空腔内。发色团是由其蛋白质内部第65～67位的“丝氨酸-酪氨酸-甘氨酸” 自身环化和氧化形成。 一 1 - 绿色荧光蛋白（GFP） 1.2 特性 一 GFP在紫外光激发下发绿色荧光的最高吸收峰为395 nm，另一小吸收峰为470 nm，最大发射峰为505 nm。 1 - 绿色荧光蛋白 1.2 特性 一 1 - 绿色荧光蛋白 1.2 特性 优点：易于检测，荧光稳定，无毒害，通用性，易于构建载体，活细胞观察 一 1 - 绿色荧光蛋白 1.3 应用 生物学研究 生态学研究 医学研究 一 2 - 质粒 2.