实验十九 根瘤或土壤中固氮酶活性的测定.pptVIP

实验十九 根瘤或土壤固氮酶活性的测定    根瘤或土壤固氮酶活性的测定 目的要求 实验材料 实验程序 思考题 目的要求 初步掌握根瘤或土壤样品中固氮酶活性测定的方法 实验材料 豆科植物根瘤或土壤样品。 102G型气相色谱仪/ 标准乙烯 灵敏度为103，衰减为1/128。 待测样品中乙烯 测定：灵敏度为104，衰减为1/1。（但可根据固氮酶活性，改变灵敏度和衰减）。 乙炔气体。 100mL带有异丁基胶塞的血清瓶。 1mL、10mL（密封性能好的）注射器，100mL微量注射器 实验程序 根瘤固氮活性的测定 土壤固氮酶活性的测定 乙烯含量的计算 实验程序Ⅰ （根瘤固氮活性的测定） 从田间挖取豆科植物植株，剪掉地上部分，根部洗净，稍干，将结瘤的根系部分分别剪开，主根上的瘤可直接剥下，侧根上的瘤要带少量根剪断，将鲜根瘤称重，收集到100mL血清瓶中，立即用异丁基胶塞密封，然后按瓶子中气相体积用注射器从瓶中抽出5—10%的空气，再用注射器注入等体积的C2H2，280C保温2h。取出瓶子，用注射器吸出100uL的混合气体，用气相色谱仪以外标法测定其固氮酶活性。 实验程序Ⅱ （土壤固氮酶活性的测定） 取田间土样15g于100mL血清瓶中，加入0.1mole/L葡萄糖液2mL，摇匀，塞上异丁基胶塞，加铝盖密封。用注射器从瓶中抽出5mL乙炔气体，280C培养2d。培养结束后，用1mL注射器从瓶中吸出0.5mL气样，用气相色谱仪测定其固氮酶活性。 实验程序Ⅲ （乙烯含量计算） 因乙烯峰高与气体中乙烯含量成正比，故可用外标法来测定待测样品中乙烯的量。 由乙烯含量的百分比，再根据血清凭中气相体积计算m moles数： 固氮酶活性用形成n moles/mg瘤鲜重或g干土/min表示。 X100 思 考 题 固氮酶活性测定的原理是什么？ 为什么测定时要用带异丁基胶塞密封的血清瓶？ 用气相色谱仪时应注意哪些重要环节？ 实验十九 结 束