基因工程DNA诱变.pptVIP

定向进化与自然进化的异同点： 定向进化的实质是达尔文进化论在分子水平上的延伸和应用。 定向进化使进化朝着人们需要的方向发展。 Kunkel 法过程包括：????① 当目标 DNA 插入 phagemid 载体并进入 E. coli CJ236 后。????② 由于该菌体 ung- dut- 突变，合成的 DNA 上含有少量尿嘧啶（取代了胸腺嘧啶）。????③ M13K07 辅助下，产生带U的ssDNA 。????④ 分离ssDNA，与引入突变的 Oligo 复性。????⑤ 在 T7 DNA polymerase 和T7 DNA ligase 作用下，以带 U 的单链 DNA 为模板合成一条新链，形成杂合双链。????⑥ 感染 dut+ ung+ E. coli　MV1190 后，在细胞分裂过程中，只有新合成的 DNA 链才能起模板作用合成新的并引入了突变位点的子代双链 DNA 。而有 U 的 DNA 链，在 dut+ 和 ung+ 产物的作用下，尿嘧啶被水解，从而失去作为模板的能力。 （二）位点选择诱变，又叫抗生素抗性回复突变法 （altered sites in vitro mutagenesis） 使用了2个引物，一个含有突变位点，另一个是选择性引物，用来恢复有缺陷的抗生素抗性基因。 质粒含有一个突变的Amp抗性基因(不能抗Amp) 将目标DNA克隆到载体中