试验五大肠菌群的测定.pptVIP

大肠菌群的测定 一、实验目的 1、掌握大肠菌群检测方法。 2、掌握微生物平板分离技术。 二、实验器材、试剂 1、试剂：乳糖蛋白胨培养基、伊红美蓝培养 基、革兰氏染色液 2、仪器：培养箱、接种环、试管、平皿、显 微镜等。 三、实验操作步骤 较清洁样品的三步法图示 三步法图示 大肠菌群测定 计算方法 美国FDA标准方法 ——行业标准采用两步法： 练习： * * * * 乳糖发酵试验 分离培养 证实试验 样品稀释后，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管乳糖胆盐发酵管。36±1℃培养48±2h，观察是否产气。 将产气发酵管培养物转种于伊红美蓝琼脂平板上，36±1℃培养18-24h，观察菌落形态。 挑取平板上的可疑菌落，进行革兰氏染色观察。同时接种乳糖发酵管36±1℃培养24±2h，观察产气情况。 根据证实为大肠杆菌阳性的管数，查MPN表，报告每100ml（g）大肠菌群的MPN值。 100mL 50mL三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液 100mL 5mL 5mL 5mL 5mL 5mL 5mL 5mL 5mL 5mL 5mL 水样 10mL 10mL 10mL 10mL 10mL 10mL 10mL 10mL 10mL 10mL 取产酸产气的发酵管中培养液在伊红美兰平板上进行划线 取有核心和带金属光泽的深紫色菌落进行革兰氏染色 乳糖蛋白胨培养液 镜检（革兰氏阴性菌） 37℃ 培养48h 证实产气（阳性）结果与否 37℃ 培养24h 37℃培养24h 挑选菌落特征：黑紫色、有光泽或无光泽菌落； 红色、粉红色菌落。 抑制剂：胆盐、煌绿、十二烷基硫酸钠。 为阴性结果的水样体积（mL）×全部水样体积（mL） MPN＝ 1000×为阳性结果的发酵管（瓶）的数目 产酸判断：紫色培养液变成黄色 产气判断：发酵导管内有小气泡，如轻轻打动试管有气泡沿管壁 上浮，应考虑可能有气体产生，需进一步试验。 用于对出口食品中大肠菌群进行检验 推测试验 证实试验 样品稀释后，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管LST肉汤发酵管。36±1℃培养48±2h，观察是否产气。 将产气发酵管培养物转种于煌绿乳糖胆盐（BGLB）肉汤中，36±1℃培养48±2h ，观察是否产气。 以BGLB产气为阳性，查MPN表，报告每ml（g）样品中大肠菌群的MPN值。 如对一自来水厂出水进行检验，初发酵一般在10支小发酵管和两支大发酵瓶内进行，复发酵在5支小发酵管内进行。以300mL进行初发酵实验，其中100mL的水样2份（分状于2个大发酵瓶中），10mL水样10份，（分状于10支个小发酵管中）。实验结果：100mL的2份水样为阴性结果，无大肠杆菌存在；10mL的水样中有5份为阳性结果，存在大肠杆菌。则： MPN=?