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细胞/组织基因组DNA提取试剂盒（离心柱型）
GK4002-50
GK4002-100
试剂盒组成
Components
GK0221
50 Preps
GK0222
100 Preps
GenClean Column
2-ml Collection Tube
Proteinase K*
ACL Solution(a)
NPB Solution
AW1 Solution(b)
AW2 Solution(c)
AE Buffer(d)
Protocol
50
50
1.2ml
25 ml
6 ml
15.5ml
12 ml
12ml
1
100
100
2.4 ml
50 ml
12 ml
31 ml
24ml
24 ml
1
*Proteinase K使用前，每管加入1 ml 无菌水溶解，混匀，分装后-20℃保存。
ACL Solution低温时可能出现结晶，请于37℃温育溶解摇匀后使用，不会影响产率。
首次使用前，必须在AW1溶液瓶中按表示量加入无水乙醇，充分混匀后使用。每次使用后将瓶盖盖紧，以保持中的AW1乙醇含量。如果您发现AW1由于运输或保管不当造成容量严重不准，请用量筒定容后再加入0.6倍体积的无水乙醇。
(c) 首次使用前，必须在AW2瓶中加入4倍体积的无水乙醇，充分混匀后使用。每次使用后将瓶盖盖紧，以保持AW2中的乙醇含量。如果您发现AW2由于运输或保管不当造成容量严重不准，请用量筒定容后再加入4倍体积的无水乙醇。
(d) AE Buffer为10 mM Tris-HCl, 0.5 mM EDTA pH 8.5。TE(pH 8.0)或者水（pH7.0）均可以使用，但是DNA的洗脱效率通常要低20%左右。
二. 制品说明
GenClean柱的内装有一层惰性大分子材料，它可以选择性吸附核酸物质，但不吸附蛋白质、多糖和其它非核酸类物质。通过ACL Solution 裂解释放出基因组DNA，然后通过GenClean柱来吸附基因组DNA，经简单的洗涤步骤除去非特异性结合的杂质, 然后用AE Buffer、TE或者水洗脱。
三．主要用途
从各种动物组织、动物细胞以及啮齿类动物(如鼠等)尾巴等材料中小量提取基因组DNA。
四．主要特点
1.?适用范围广，适用于各种动物组织材料基因组DNA的抽提。
2.?无须酚和氯仿抽提，无须乙醇沉淀。
3.?DNA纯度好，得率高，无蛋白质和RNA污染。
五. 操作步骤：
样品预处理：
·动物组织：
1.?切取5～20mg的动物组织材料，在液氮中将组织研磨成粉末，并转移至1.5ml的离心管中。
然后加入400μl ACL Solution，如有凝结块，可以用枪头吹吸打碎。震荡混匀1分钟，加入20μl
Proteinase K然后置于55℃放置20分钟～3小时，在此期间间或取出混匀，有助于充分裂解。裂解完全的样品应澄清透明。不同来源的组织，完全裂解时间可能差异较大。?
取出样品，待降至室温时轻轻震荡混匀。
·啮齿类动物(如鼠等)尾巴：
1. 从动物尾部末端切取0.5～1cm的组织材料，在液氮中将组织研磨成粉末，并转移置1.5ml的离心管中。
2.?然后加入400μl ACL Solution，震荡混匀1分钟，加入20μl Proteinase K然后置于55℃水浴1～3小
时，在此期间可以适当取出混匀，有助于充分裂解。
3.?取出样品，待降至室温时轻轻震荡混匀。
·培养成熟的动物细胞：
1.?在500～1000rpm下离心约3～5分钟，收集细胞( 约5x106 )。
2.?加入400μl ACL Solution震荡混匀1分钟，加入20μl Proteinase K,然后置于55℃水浴10～20分钟，在此期间可以适当取出混匀，有助于充分裂解。
3.?取出样品，待降至室温时轻轻震荡混匀。
DNA提取：
经过上面预处理的样品按照下面步骤提取基因组DNA。
4.?在经过预处理好的样品中，依次加入100μl NPB溶液，用力摇匀，至于70℃ 10 min。
5. 冷却到室温，加入250μl无水乙醇，混匀，如果有沉淀出现，用蓝枪头吹打混匀，加到吸附柱上。
6.?8,000rpm离心1分钟，取下GenClean Column，倒掉收集管中废液。
7.?将GenClean Column放回收集管中，加入500μl AW1 Solution，8,000rpm，室温离心1分钟,倒掉废液。
8.?将GenClean Column放回收集管中，加入500μl AW2 Solution ，8,000rpm，室温离心1分钟,倒掉废液。
9. 重复步骤8一次。
10. 取下GenClean柱，弃去收集管中的废液。将柱放回收集管中，12,000rpm，室温离心1分钟，以除去残留AW2 Solution。
11. 将柱
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