可用瘤细胞悬液接种.ppt

116 ˙恶性肿瘤——常见病、多发病˙全世界每年700万死亡；占欧美死亡第二位˙我国城市居民第一位，农村第三位˙恶性肿瘤人类健康重要——杀手 第一节 自发性肿瘤动物模型 一、自发性乳腺癌模型 生长在体表,易早期发现,罕有自发消退,因而能准确观察其大小与生长速度,便于进行实验。 现介绍三种自发性乳腺癌小鼠模型 CBA小鼠：雌鼠自发性乳腺癌发生率为60%~65%。 在乳腺左右两侧及乳头部均可发生肿瘤。每只小鼠常见1个以上肿瘤。选择肿瘤数目和大小相近的动物, 配对分组,给予受试药,观察受试药对肿瘤发展的影响。 将肿瘤体积变化对时间作出生长曲线,可由曲线的斜率变化判断药物抑制肿瘤生长的作用,尤其应观察肿瘤能否完全消退。 二、AKR白血病模型 AKR小鼠为白血病高发品系，淋巴细胞白血病发病率雄性76%~90%，雌性为68%~90%。 [自发性肿瘤的总体评价] 第二节 诱发性肿瘤动物模型 [基本原理] 一、诱发性肿瘤动物模型的基本方法 常用的致癌物给予方法和途径 常用的致癌物给予方法和途径 二、诱发性肿瘤模型的动物和致癌物 动物：大鼠，小鼠，犬等 致癌物： 多环碳氢类 亚硝胺类 偶氮类 黄曲霉毒素 （饲料中含0.001~0.015ppm黄曲霉毒素B1, 喂养6个月,诱发大鼠肝癌）。 ppm = parts per million [诱发性肿瘤模型的总体评价] (2)瘤块接种法：选取接种后7~10d生长状态良好的瘤源动物，颈椎脱臼处死，消毒操作部位皮肤。切开皮肤，剥离出瘤块，置于平皿上,平皿应放置在冰块上,内置少许灭菌的PBS或其他营养液,剔除非肿瘤组织和坏死组织，选取生长良好而无变性坏死、淡红色、鱼肉状的瘤组织，在无菌平皿内剪成2mm3的小块。  黑色素瘤则呈黑色或黑紫色 注意不用瘤中央的坏死部分 另取小量腹水,置于加有肝素的干试管内,作为观察细胞形态及细胞计数用。 将空针中剩余的腹水制备推片,瑞氏染色,镜下进行细胞分类计数,其中瘤细胞数应≥95%。 (2)细胞计数： 取肝素管内的瘤细胞,用生理盐水稀释10倍;取稀释液0.9ml,加0.2%台盼蓝生理盐水溶液0.1ml混匀。用血细胞计数法计数瘤细胞总数和死细胞数。  瘤细胞死亡后，细胞膜通透性发生改变，细胞可被台盼蓝染成蓝色, 而活细胞不着色。 (3) 接种： 腹水用含葡萄糖的无菌Hanks液稀释至适当的浓度, 每只鼠腹腔注入0.1~0.2ml。整个操作应在60min内完成。 3. 白血病株的接种 腹水型白血病如L1210及P388的接种方法同腹水型肿瘤接种法。 一、实体瘤(√) ? [分组给药] 接种次日将动物随机分组： ☉实验对照组(C)：接种肿瘤细胞不给受试药，只给受试药相应的溶剂 ☉受试药组(T)：设高、中、低3个剂量 （给药1次或数次，给药途径应与推荐临床用药的途径相同，静脉给药者可用腹腔注射代替）。 ☉阳性对照药：对瘤株活性高的已知抗肿瘤药 ＊对S180 , 艾氏腹水癌实体型 可用环磷酰胺20~ 30 mg /(kg .d) ＊对L615 可用5-氟尿嘧啶25mg /(kg.d) ＊对其他腹水型肿瘤一般用丝裂霉素 2mg / (kg.d) ＊对W256 可用丝裂霉素4mg/ (kg.d)+环磷酰胺20~ 30mg/(kg.d ) [疗效评价] 停药24h后处死动物,称体重,剥离瘤块, 称瘤重。受试药物对实体瘤的疗效以瘤重抑制率表示： C－T 瘤重抑制率 (%)= ×100% C 式中T:受试药物组平均瘤重; C:实验对照组 (模型组,荷瘤未用药动物) 平均瘤重。 (瘤重抑制率%=[(1－T/C)]×100%计算） 观察瘤重抑制率时，要求实验对照组小鼠瘤重均值不得低于1g（大鼠瘤重均值不得低于2g），否则表示肿瘤生长不良，实验作废。 给药组动物平均体重下降（给药前后自身比较）不得超过15%，动物死亡数不得超过20%，否则表示受试药有毒性反应，应减少剂量重新实验。 若中草药瘤重抑制率大于30%，合成药大于40%，且与实验对照组比较具有统计学意义，重复3次，疗效均稳定，则评定该受试药具有一定抗肿瘤作用。 [注意事项] 实验中如果几个药给药组共用一个实验对照组时