现代抗体技术及其应用.ppt

双链抗体 缩短Linker 二价双链抗体 ScFV 0—5个氨基酸 双特异性抗体( bispecific antibody，BsAb) 一个 结合靶细胞上的特异性抗原 另一个结合淋巴细胞或吞 噬细胞等效应物 双特异性抗体的 2个抗原结合部位 两条抗原结合臂可分别来自 FV段、Fab段、ScFV或dsFv 导致效应细胞靶向杀灭 肿瘤细胞 有二价、四价、六价 双特异抗体的设计和运用 化学交联：分别分离纯化两种亲本单抗，采用还原剂使其解链，获得单价抗体，再采用异双功能交联剂，把两种具有不同抗原特异性的单价抗体或其片段交联起来； 细胞工程：采用细胞融合的方法，将分泌单抗的杂交瘤与经免疫的脾细胞结合，或者使两种分泌不同单抗的杂交瘤细胞融合； 基因工程：多采用抗体分子片段，Fab、ScFV等经过基因操作修饰后，通过体外组装成BsAb或者直接表达分泌型的BsAb 此法缺点是容易导致抗体失去活性，产物均一性不佳。 多倍杂交瘤细胞的稳定性差，BsAb的产量少且活性低，费时费力，临床应用时存在人抗鼠抗体免疫反应 (HAMA)，因此不适用于临床。 1）靶向性好：用高价BsAb 靶向目标抗原可使药物选择性地结合到高抗原密度的肿瘤组织区，正常组织抗原密度低于BsAb 的结合域值，因而BsAb极少渗透入正常组织，从而提高了BsAb 的靶向性。 实例：Lu 等设计了3 价抗ErbB2 /CD16 的BsAb，它包括2 个结合ErbB2 的ScFv 形式结合位点和一个定位于NK 细胞的单价Fab 片段位点 2）是一种有效的抗肿瘤策略：Michaelson 等将抗LTβR 的ScFv 片段融合于抗TRAIL-R2 单抗的重链端，设计了以TNF家族膜受体TRAIL-R2 和LTβR 为靶点的IgG 样BsAb。该抗体血浆半衰期长，体外实验中能有效抑制多种肿瘤细胞的生长，在小鼠肿瘤移植模型中较之亲本抗体能更显著地减小肿瘤体积； 3）具有更强的杀伤淋巴瘤细胞的功效，且对同体正常B 细胞的作用较弱：Rossi 等报道了一对来自抗CD20 IgG1κ)和依帕珠单抗( epratuzumab ) 的人源化6 价抗CD20 /22 的BsAb———20-22 和22-20。它们无需第二抗体交联即可诱导肿瘤细胞凋亡和增殖抑制 基因工程抗体-3.新型抗体分子 1）放射性标记的抗体片段：，通过抗体特异性的识别作用使放射性物质有效地导向肿瘤组织局部，用于放射免疫治疗; 2）抗体-化疗药物结合物：通过化学方法使抗体和化疗药物的某些基团偶联，在特异的作用位点产生细胞毒作用进行免疫化疗; 3）抗体-酶连接物：利用抗体导向作用，将催化前体药物的酶携带至肿瘤局部，待血液循环及正常组织中非特异分布的抗体酶药物廓清后再注射前体药物，在肿瘤局部造成高浓度化疗药物的微环境，从而高效率杀伤肿瘤细胞。 基因工程抗体-3.新型抗体分子 4）细胞内抗体 将小分子抗体基因加上定位信号序列，使其在细胞内特定部位表达，可中和或调节位于特定亚细胞部位的活性分子或者触发免疫反应，即为细胞内抗体( intrabody). 细胞内抗体主要应用于疾病的基因治疗。 工程化的细胞内抗体为探索膜蛋白新的功能提供了重要的分子靶向工具。 Hayashi 等成功合成了针对γ 分泌酶复合体重要成分nicastrin( NCT) 的ScFv 胞内抗体，生化分析结果显示，该抗体能扰乱内源性NCT 的正常折叠和糖基化成熟，进而影响γ 分泌酶复合体的稳定性及内源蛋白水解活性。 通过基因重组改良抗体性能 小分子抗体（穿透力强） 人源化抗体（降低抗原性） 双价或双特异性抗体（增强抗体的亲和力及效－靶细胞的相互作用）。 抗体融合蛋白（增加蛋白的半衰期；与药物，毒性分子或酶基因融和表达，可用于肿瘤等疾病的治疗）。 细胞内抗体（用于胞内治疗或信号转导研究）。 基因工程抗体-1.完整的抗体分子 嵌合抗体 人源化抗体 完全人源抗体 部分已批准上市的治疗性单抗 嵌合抗体 (chimeric?antibody) 由在基因水平上连接的小鼠抗体V?区及人抗体C?区组成。这种抗体含75%～80%人抗体,?20%鼠抗体,?保留了原来鼠源单抗的特异性,?但对人体仍具一定的免疫原性。 嵌合抗体 (chimeric?antibody) 嵌合抗体 (chimeric?antibody) 人源化抗体(humanized?antibody) 通过置换三个发夹状环的鼠抗体超变区（CDR），使构成抗原结合部位的轻重链各3?个CDR?区是鼠源的,?其余均为人源的。该抗体对人的免疫原性大大降低,?但与抗原的亲和力也有所下降。虽然目前通过选择与鼠单抗同源性大的抗体及改变骨架(fragment?reg