DNA的测序方法、的原理及其应用.ppt

* * DNA的测序方法、原理及其应用 一、DNA序列测定概述及其发展 即核酸DNA分子一级结构的测定，是现代分子生物学一项重要的技术。 　　 其基本原理是DNA?的复制反应体系中需要存在DNA?聚合酶、DNA?模板、寡核苷酸引物和dNTP，引物和模板退火形成双链后，DNA?聚合酶在引物的引导下在模板链上沿3’→5’的方向移动，dNTP?按照碱基配对原则，逐个连接在引物的3’-OH?末端。 1963年，Sanger和Thompson等人第一次完成胰岛素51个 氨基酸的序列测定，这在当时来说是一件了不起的大事。70 年代后期，Sanger和MaxamGilbert等人又建立了核酸序 列测定的方法，Sanger双脱氧末端终止法和Maxam Gilbert化学裂解法将核酸序列测定技术推进到“直读”阶段， 使核酸序列测定变得远比蛋白质氨基酸序列测定容易，这样 人们可以通过核酸序列和遗传密码推导出蛋白质氨基酸的序 列。 二、测序的常用方法 DNA序列测定常用方法有如下3种： 1、末端终止法 2、化学裂解法 3、DNA测序自动化 使用特异性引物与单链模板DNA退火，在DNA聚合酶作用下进行延伸反应，用ddNTP终止，用PAGE区分长度仅相差1个核苷酸的ssDNA，从而完成测序的方法。 用化学试剂在A、G、C、T处特定的裂解DNA片段，产生