实验 微波辅助提取高效液相色谱法测定蔬果中的vc含量(新).pptVIP

b. 光电二极管阵列检测器 紫外检测器的重要进展 光电二极管阵列检测器：1024个二极管阵列，各检测特定波长，计算机快速处理，三维立体谱图。 c. 示差折光检测器 除紫外检测器之外应用最多的检测器； 可连续检测参比池和样品池中流动相之间的折光指数差值。差值与浓度呈正比； 通用型检测器（每种物质具有不同折光指数） 灵敏度低、对温度敏感、不能用于梯度洗脱 偏转式、反射式和干涉型三种 二、HPLC使用与基本维护 a) 色谱柱 是液相色谱分析的核心组件； 根据分析对象的性质选取合适的色谱柱，如正相色谱柱、反相色谱柱、离子交换色谱柱等； 正相色谱：流动相极性小于固定相极性，极性小的先流出，适于极性组分分离；如硅胶柱、羟基、氰基等。 反相色谱：流动相极性大于固定相极性，极性大的先流出，适于非极性组分分离；如烷基键合硅胶柱C8、C18等。 1-----方法建立 正相色谱 低极性流动相 反相色谱 高极性流动相 中等极性流动相 中等极性流动相 时间 时间 时间 时间 待测物极性：ABC 正、反相色谱中极性和保留时间的关系 正相色谱和反相色谱出峰顺序相反 时间，min 固定相：C1 固定相：C8 固定相：C18 硅胶-烷基键合相中烷基链长对反相色谱分离的影响 1-尿嘧啶；2-苯酚；3-乙酰苯；4-硝基苯；5-苯甲酸甲酯；6-甲苯 可见：反相键合色谱中，键合相碳链越长，分离效果越好。 b) 流动相 按流动相组成分：单组分和多组分； 按极性分：极性、弱极性、非极性； 按使用方式分：固定组成淋洗和梯度淋洗。 常用溶剂： 己烷、四氯化碳、甲苯、乙酸乙酯、乙醇、乙腈、水。 采用二元或多元组合溶剂作为流动相可以灵活调节流动相的极性或增加选择性，以改进分离或调整出峰时间。 在选择溶剂时，溶剂的极性是选择的重要依据。 采用正相液-液分配分离时：首先选择中等极性溶剂，若组分的保留时间太短，降低溶剂极性，反之增加。 也可在低极性溶剂中，逐渐增加其中的极性溶剂，使保留时间缩短。 常用溶剂的极性顺序： 水(最大) 甲酰胺 乙腈 甲醇 乙醇 丙醇 丙酮 二氧六环 四氢呋喃 甲乙酮 正丁醇 乙酸乙酯 乙醚 异丙醚 二氯甲烷氯仿溴乙烷苯四氯化碳二硫化碳环己烷己烷煤油(最小) 选择流动相时应注意的几个问题 （1）尽量使用高纯度试剂作流动相，防止微量杂质长期累积损坏色谱柱和使检测器噪声增加。 （2）避免流动相与固定相发生作用而使柱效下降或损坏柱子。如使固定液溶解流失；酸性溶剂破坏氧化铝固定相等。 （3）试样在流动相中应有适宜的溶解度，防止产生沉淀并在柱中沉积。 （4）流动相同时还应满足检测器的要求。当使用紫外检测器时，流动相不应有紫外吸收。 溶剂(流动相)组成对色谱分离的影响 1：9,10-蒽醌；2：2-甲基-9,10-蒽醌；3：2-乙基-9,10-蒽醌；4：1,4-二甲基-9,10-蒽醌；5：2-特丁基甲基-9,10-蒽醌； 70%CH3OH +30H2O 60%CH3OH +40H2O 50%CH3OH +50H2O 40%CH3OH +60H2O 由于分析物组成复杂，以某一组成的流动相可能使部分待测物得到好的分离，但同时出使其它待测物的分离不令人满意！实际工作中采用程序升温（GC）和梯度淋洗（LC）来解决这个问题。 色谱分离中的问题---梯度洗脱 2-----简单维护 1、 为什么溶剂和样品要过滤? 溶剂和样品过滤非常重要，它会对色谱柱、仪器起到保护作用，消除由于污染对分析结果的影响。 色谱柱：由于填料颗粒很细，色谱柱内腔很小，溶剂和样品中的细小颗粒会使色谱柱和毛细管容易堵塞。 仪器：溶剂和样品中的细小颗粒会增加进样阀的堵塞和磨损，同时也会增加泵头内的蓝宝石活塞杆和活塞的磨损。 样品过滤头的类型： 30 mm内径：适用于大进样量的过滤，材料有纤维素,醋酸纤维，聚四氟乙烯。处理样品体积少于50 ?L。 13 mm内径：适用于范围广的过滤，材料为纤维素。 3 mm内径：适用于小进样量的过滤，处理样品体积为7 ?L。 滤膜类型： 聚四氟乙烯滤膜：适用于所有溶剂，酸和盐，并无任何可溶物。 醋酸纤维滤膜：不适用于有机溶剂；适用于水溶液。 尼龙66滤膜：适用于绝大多数有机溶剂和水溶液，可用于强酸，70%乙醇、二氯甲烷、不适用于二甲基甲酰胺。 再生纤维素滤膜：具有蛋白吸收低，同样适用水溶性样品和有机溶剂。 2、 流动相使用前为什么要脱气？ 流动相使用前必须进行脱气处理 ，以除去其中溶解的气体（如O2），防止在洗脱过程中当流动相由色谱柱流至检测器