杜梨类钙调磷酸酶B亚基蛋白基因PbCBL2的克隆和功能初探-园艺学报.pdf

园 艺 学 报 2013 ，40 （8 ）：1445 –1455 http: // www. ahs. ac. cn Acta Horticulturae Sinica E-mail: yuanyixuebao@126.com 杜梨类钙调磷酸酶 B 亚基蛋白基因 PbCBL2 的 克隆和功能初探 1,2,* 1,3,* 4 1,2,** 1 1 李 慧 ，李刚波 ，丛 郁 ，常有宏 ，蔺 经 ，盛宝龙 1 2 （江苏省农业科学院园艺研究所，南京 210014 ； 国家农业科技华东（江苏）创新中心——高效园艺作物遗传改良 3 4 实验室，南京 210014 ； 南京农业大学园艺学院，南京 210095 ； 中国科学院南京土壤研究所土壤与农业可持续发 展国家重点实验室，南京 210008 ） 摘 要：类钙调磷酸酶 B 亚基蛋白（Calcineurin B-like protein，CBLs ）是植物中一类重要的钙离子 传感器，参与调控植物生长发育及逆境胁迫响应过程。为了探明杜梨 CBLs 家族成员 PbCBL2 的序列特征 和表达模式，以杜梨（Pyrus betulaefolia Bunge ）幼苗为试材，运用EST 搜索结合 RACE 技术、染色体步 移法对 PbCBL2 的 cDNA、DNA 和启动子进行克隆，采用半定量 RT-PCR 和原核表达研究该基因在非生 物胁迫下的表达模式。结果表明，PbCBL2 基因 cDNA 序列长 681 bp，编码一个含有 226 个氨基酸残基的 蛋白。基因组 DNA 序列长 1 927 bp，包括 8 个外显子和 7 个内含子，启动子序列包含光反应元件、厌氧 诱导必需顺式作用元件、赤霉素反应元件和水杨酸响应顺式作用元件。PbCBL2 编码的多肽具有植物类钙 调磷酸酶 B 亚基蛋白结合 Ca2+所必需的 4 个 EF 手型结构和 1 个典型的植物钙调磷酸酶 A 亚基结合位点。 未经处理的杜梨幼苗（对照）根和叶中未检测到 PbCBL2 的表达，PbCBL2 的表达受NaCl 、PEG6000 、甘 露醇和 ABA 诱导上调。PbCBL2 转入大肠杆菌 BL21 （DE3 ）后，能够明显减轻NaCl 、甘露醇和 PEG6000 对该菌株的生长抑制。PbCBL2 基因具备植物 CBLs 基因家族的固有特征，对盐碱、干旱、渗透胁迫和 ABA 处理均存在转录响应，大肠杆菌转入该基因后能够提高对盐胁迫和渗透胁迫的耐受能力。 关键词：杜梨；类钙调磷酸酶 B 亚基蛋白；基因克隆；基因表达特点；原核表达；逆境胁迫 中图分类号：S 661 文献标志码：A 文章编号：0513-353X （2013 ）08-1445-11 Isolation of a Calcineurin B-like Protein Gene PbCBL2 from Pyrus betulaefolia and Preliminary Study of Gene Function 1,2,* 1,3,* 4 1,2,** 1 1 LI Hui ，LI Gang-bo ，CONG Yu ，CHANG You-hong ，LIN Jing ，and SHENG Bao-long 1