课件：Wesernblo蛋白质双向电泳的原理方法及在医学中的应用最终版.ppt

Western blot法诊断囊虫病 应用荧光定量PCR 和Western- blot 检测RNA干扰肺腺癌A549 细胞STAT3基因表达水平 Western-blot法测定风疹病毒特异性抗原 Western Blot的三大医学应用 1、Western blot法诊断囊虫病 囊虫病是由猪带绦虫幼虫即囊尾蚴寄生于人体引起的人兽共患寄生虫病。 免疫学试验对本病诊断有重要作用，但目前用各种方法纯化的抗原其敏感性、特异性均不理想。 运用DN A重组技术,构建来源于猪囊尾蚴的cDNA表达文库,以囊虫病患者血清及病猪血清为抗体,从中筛选出4个特异性抗原（cC1、cC2、cP1、cH1）,这些抗原克隆经IPTG诱导,形成β-半乳糖苷酶-猪囊尾蚴特异性抗原的融合蛋白( fusion protein, FP)。 采用简化Western blot法,以等比混和的四种融合蛋白为抗原检测囊虫病、华支睾吸虫病、包虫病患者血清中的相应抗体 2、应用荧光定量PCR 和Western- blot 检测RNA干扰肺腺癌A549 细胞STAT3基因表达水平  Western印迹分析检测STAT3表达 荧光定量PCR 检测STAT3mRNA 的表达  凋亡相关蛋白的表达 Western Blot 检测发现 Western Blot 检测 SZL 作用 48 h 后凋亡相关蛋白表达的变化 Bandleader 软件分析凋亡相关蛋白的相对表达率 Western Blot 检测结果的密度分析扫描直方图 (凋亡相关蛋 白相对表达率 = 条带灰度值 /actin 灰度值) 3、Western-blot法测定风疹病毒特异性抗原 风疹病毒(ＲＶ) 能够引起先天感染。通过孕妇传播,致使胎儿先天畸形或导致先天性风疹综合征如先天性心脏病、智力低下等。 因此能够早期快速诊断对于优生优育、提高人口素质 、预防后天及再感染具有重要意义。 目前临床上所用的ELISA 检测试剂盒所包被抗原为全细胞粗制抗原 , 特异度低、灵敏度差,缺乏统一的抗原标准。 现可采用Western-blot的方法,测定风疹病毒的主要抗原性蛋白, 以指导临床应用 。 双向电泳技术的应用 04 part 03 02 01 计算机图像分析与大规模数据处理技术 双向电泳技术(2-DE) 质谱技术 研究蛋白质组的三大核心技术: 双向电泳技术(2-DE)在蛋白质组学中发挥着重要的作用,可用于研究样品总蛋白、不同样品蛋白质表达差异、蛋白质间相互作用、蛋白质修饰等。 作用 1双向电泳技术在病原微生物蛋白质组研究中的进展 双向电泳技术在病原微生物蛋白质组学研究中发挥着重要作用，可用于研究样品总蛋白、不同样品蛋白质表达差异、蛋白质问相互作用、蛋白质修饰等。病原微生物的蛋白质组学研究，可以了解其毒性因子、致病机理以及药物抗性等方面，对疾病的诊断、治疗和预防非常重要。 01 02 ①通过双向电泳技术分析对培养基和细胞内生长的细菌进行比较，发现感染巨噬细胞的军团菌、布鲁氏菌、沙门氏菌中分别有一些特殊蛋白被诱导或被阻遏。 ②蛋白质组学双向电泳技术可作为致病微生物临床隔离群区分的可靠参数之一。在对流感嗜血杆菌研究中发现，实验室培养的和临床分离的遗传背景相同的菌株出现了新的ORF，对临床分离株NCTC8143进行双向电泳，发现色氨酸酶的含量较高，而实验室培养的菌株中则没有色氨酸酶。 双向电泳技术在病原微生物致病机理研究中的应用 双向电泳技术在病原微生物药物抗性基因功能研究中的应用 双向电泳技术可以进行微生物抗性机理的研究。 Diffes等对Divercin V4l抗性和野生型的产单核细胞 李斯特氏菌进行2-DE分析，发现至少在17个蛋白质存在差异，抗性菌株中缺乏野生型菌株中的9个蛋白质，而新增8个蛋白质，其中只有1个Rl是存在于已知该菌的数据库中，为鞭毛蛋白；机会致病真菌如念珠菌属产生了许多的耐药菌株。 伊曲康唑类化合物通过抑制真菌细胞壁的d-葡萄糖的合成而起作用，而且对耐真菌药物的菌株起作用。Bruneau等对比mulundocandin、氟康唑和伊曲康唑3种杀真菌药处理所产生的白色念珠菌双向电泳差异蛋白质图谱后认为，氟康唑和伊曲康唑在蛋白质组水平具有共同的作用机制。 因此，病原微生物的耐药菌株和敏感菌株的双向电泳研究，对阐明耐药相关机制、鉴定新的药物靶位和耐药诊断标志有非常重要的价值。 人们通过双向电泳技术分离正常组织细胞与肿瘤之间的差异蛋白质组分，在寻找肿瘤的特异标志物、揭示肿瘤的发病机制以及开发新的肿瘤治疗方式和治疗药物提供理论依据等方面都取得了一些重要的进展。肿瘤发生的早期常常无任何症状，而只有在转移时才容易被发现，这往往导致延误了治疗的最佳时期。因此找到肿瘤早期的标志物进行及