高中生物选修3第专题11.2基因工程的基本操作程序.pptVIP

1.2基因工程的基本操作程序Ⅱ 专题一基因工程 学习目标 1.说出出基因工程的四个操作步骤 2.分析基因工程四个步骤的原理、工具及具体的操作程序 3.尝试设计基因工程的操作程序 基因工程的基本操作程序 目的基因的获取 基因表达载体的构建 目的基因导入受体细胞 目的基因检测与鉴定 第一步 第二步 第三步 第四步 基因表达载体的组成： 目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用。 a、目的基因 b、启动子 c、终止子 d、标记基因 1.转化: 合作探究1. 将目的基因导入受体细胞 2.常用的受体细胞： 动物细胞、植物细胞、微生物（大肠杆菌、土壤农杆菌、枯草杆菌等）细胞。 3.将目的基因导入受体细胞的原理： 借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。 且侵染途径，且因受体细胞的不同而不同。 目的基因进入_________内，并且在受体细胞内维持_____和_____的过程。 受体细胞 稳定 表达 ①农杆菌转化法 方法—1.导入植物细胞 （见教材P12“生物技术资料卡”） ②基因枪法 ③花粉管通道法 利用农杆菌Ti质粒上T-DNA可转移至受体细胞并整合到受体细胞染色体DNA上的特点。 显微 注射 分裂 分化 移 植 发 育 2.导入动物细胞 含目的基因的表达载体 动 物 的 受 精 卵 含目的基因的受精卵 早 期 胚 胎 雌性动物输卵管或子宫 转基因 动 物 问题 为什么将目的基因导入动物细胞常用的受体细胞是受精卵？ 显微注射技术 3.导入微生物细胞 繁殖快、单细胞、遗传物质少 大肠杆菌（E.coli） 1. 过程 Ca2+ 处理法 用Ca2+处理细胞 感受态细胞 表达载体与感受态细胞混合 感受态细胞吸收DNA分子 2.原核生物特点 3. 常用受体细胞 ☆思考回答1.为什么基因工程科学家常采用细菌、酵母菌等微生物作为受体细胞？ ☆思考回答2. 为什么要用Ca2＋处理细胞？ 繁殖快、遗传物质相对较少、操作简单、价格低廉。 因为大肠杆菌等细菌的细胞壁成分主要是肽聚糖，因此一般要先用Ca2＋处理，以增加细菌细胞壁的通透性。 方法 导入植物细胞 导入动物细胞 导入微生物细胞 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 ——显微注射法 —— Ca+处理法 将目的基因导入受体细胞 体细胞、受精卵 受精卵 细胞/个体 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 显微注 射技术 用Ca2+处理成感受态细胞 采用基因工程的方法培育抗虫棉，下列导入目的基因的作法正确的是（　　）A.将毒素蛋白注射到受精卵中B.将编码毒素蛋白的DNA序列，与质粒重组，导入细菌，用该细菌感染棉的体细胞，再进行组织培养C.将编码毒素蛋白的DNA序列，与质粒重组，注射到棉的子房并进入受精卵D.将编码毒素蛋白的DNA序列，注射到棉受精卵中 合作探究2. 目的基因的检测与鉴定 目的基因是否真正插入受体细胞的DNA中，是否能够在受体细胞中稳定遗传和正确表达，只有通过检测、鉴定才能得知。 常用的检测手段主要从分子水平和个体水平进行。 个体水平定鉴 DNA分子杂交 显示出杂交带 分子杂交技术 显示出杂交带 抗原—抗体杂交 显示出杂交带 接种 抗性以及抗性 目的基因的检测与鉴定 —检查是否成功 适当限制 酶切割 用同位素标记的 目的基因片段杂交 1. 检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因 提取受体生 物全部DNA DNA片段 显 出 杂交带 （表明目的基因已插入） DNA分子杂交技术 用同位素标记的 目的基因片段杂交 2. 检测目的基因是否转录出了mRNA 提取受体生 物的mRNA 显 出 杂交带 （表明目的基因已转录出了mRNA） 特别提醒：检测DNA利用的是DNA与DNA杂交，检测mRNA利用的是DNA与mRNA杂交。 分子杂交技术 胰岛素是治疗糖尿病的特效药，长期以来只能依靠从猪、牛等动物的胰腺中提取，100Kg胰腺只能提取4-5g的胰岛素，其产量之低和价格之高可想而知。 假如让你用基因工程的方法使大肠杆菌生产出人的胰岛素，想一想，如何设计？ 【探究2】尝试设计（目标三 难点突破） 1、从人的DNA中提取胰岛素基因（目的基因）, 并从大肠杆菌的细胞质中提取环状质粒.使用限制酶。 2、表达载体构建。用同种限制酶切割目的基因与质粒,再用DNA连接酶将目的基因与质粒“缝合”，加启动子、终止子等。 3.将质粒导入大肠杆菌。在大肠杆菌的培养液中加入含Ca2+的物质,如CaCl2, 此时将表达载体也放入培养液中,大肠杆菌会将有目的基因表达载体吸收。 4.胰岛素的产生: 在大肠杆菌内,目的基因通过表达即转录与翻译后,就产生出胰岛素蛋白质.通过大肠杆菌的大量繁衍,便可大量生产出人的胰岛