DNA重排的检测方法讲义.ppt

转基因材料外源基因的检测 1,标准分子量；2，质粒；3，对照；4-8，转基因植株 1 2 3 4 5 6 7 8 转基因黑麦草PCR检测外源Ubi启动子 (1) PCR-RFLP: 多聚酶链反应(PCR)--限制性片段长度多态性 (restriction fragment length Polymorphism，RFLP) 原理：PCR产物－限制性内切酶切－多态性分 析，DNA发生重排后，酶切位点发生改变。 优点：具有分辩率高，无需标记,重复性好， 简便快速直观等。主要用于核酸变异性分析 与比较, 微生物的分群分型分亚型，癌基因 分析，遗传病的诊断等。 局限：只能应用突变引起限制性酶切位点改变 的情况下，一次只能完成一个特定位点突变 筛选，检测效率低。 3. PCR相关技术 PCR-RFLP原理示意 原理：是将经扩增的DNA片段经过变性处理，形成单链，由于序列不同，单链构象就有差异，在中性聚丙烯酰胺凝胶中电泳的迁移率不同，通过与标准物的对比，即可检测出有无变异。 刚建立时是将同位素掺入PCR扩增的产物中，通过放射自显影显示结果。后用银染取代同位素显示DNA带型，大大降低了成本，具有经济、快速、灵敏等特点。1993年起用EB染色法显示DNA带型，使得SSCP操作更简单，更