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稻米粗蛋白质含量的测定 作物品质分析 湖南农业大学 凯氏定氮法 1、实验目的与要求 2、实验原理 3、材料及用具 4、方法步骤 5、作业 教学内容 一、实验目的与要求 通过实验，要求学生初步掌握凯氏定N法测定稻米粗蛋白质含量的基本原理与方法。 二、实验原理 稻米的含氮物质中，包括蛋白质氮和非蛋白质氮两大类。 用强酸（H2SO4）和高温消化，使含氮物质转化为（NH4）2SO4，再经碱作用分解为氨气，以硼酸吸收，通过酸碱滴定定量，再乘以一个系数，得到蛋白质的总量。 二、实验原理 (1)有机物（米粉）+H2SO4+催化剂 →（NH4）2+CO2+SO2+H2O （2）（NH4）2SO4+2NaOH(内室反应） →2NH3+2H2O+Na2SO4(冷凝） （3）NH3+H3BO3（紫红色） →H2BO3NH3（蓝绿色） （4）H2BO3NH3（蓝绿色）+HCl →NH4Cl+H3BO3(红褐色） 三、实验材料与用具 ①籼或粳稻不同米质的稻谷品种； ②凯氏微量定N器、消煮炉、微量滴定管、移液管、溶量瓶、三角瓶等。 四、实验方法与步骤 1、消化 2、蒸馏 3、滴定 4、结果计算 1、消化 称取试样(过40目筛）0.1g（精确到0.0001g）于消化管中，加混合催化剂1g，再加入3～5ml硫酸及5-6滴高氯酸，稍加振摇，后置于消煮炉上，在通风橱加热进行消化。开始时用低温(200℃）加热，勿使瓶中泡沫超过瓶肚2/3，待泡沫减少和烟雾变白后再增加温度(300℃）保持微沸。消化到溶液呈浅蓝绿色透明状时，再继续加热沸腾10min，取出等消化液冷却至室温后，加水10～20ml，再待溶液温度降到室温后，转入50 ml容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀备用。 1、出水夹 2、进水管 3、蒸馏管外室 4、进水夹 5、冷凝管 6、进样漏斗 7、蒸馏管内室 8、漏斗夹 9、出水口 10、冷凝管口 2、蒸馏 2、蒸馏 1）先关紧出水夹，打开水龙头和进水夹； 2）水位到达蒸馏装置球部上端凹面位置（注水达球面约2/3，约40ml）； 3）加10ml 2%硼酸溶液及2滴混合指示剂于三角瓶中； 4）将冷凝管中浸入硼酸溶液中； 5）从小漏斗加入5ml消化液，用少量（约2ml）蒸馏水冲洗入口； 6）从小漏斗加入5ml 40%的NaOH溶液； 7）立即用水（2-5ml）冲洗两次后，关紧铁夹，并加入少量水于漏斗中，以防漏气； 2、蒸馏 8）点燃酒精灯，置于蒸馏装置下； 9）蒸馏至硼酸由紫红色变成蓝绿色，记时5min； 10）将冷凝管离开硼酸液面，继续蒸馏1min； 11）用蒸馏水冲洗冷凝管下端的管口，洗液均流入三角瓶中； 12）停止蒸馏，移走酒精灯和三角瓶（此过程不松开铁夹） 13）内室液体倒吸入蒸馏管外室，外室排出废液，再冲洗反应室； 14）打开上部进样品的漏斗铁夹，然后打开出水夹，再打开进水夹。 15）在不加消化液下，重复上述操作过程。