流式细胞术免疫标记简介完整.pptVIP

巨核细胞系 在巨核细胞系发育过程中依次出现PPO、CD41a（Ⅱb/Ⅲa）、CD41b（Ⅱb）和CD61（Ⅲa）、CD42（Ⅰb）。还可表达CD36（强）。 正常情况下血小板处于静止状态。目前研制出的抗血小板单抗如CD9、CDw17、CD31、CD36、CD41a、CD41b、CD42a、 CD42b、CD61，主要都针对静止的血小板。 当血小板被激活时，血小板中颗粒内容物释放，整合到活化的血小板质膜内，成为一些激活抗原，如CD62 （P-选择素）、CD63及CD107a和CD107b。 红细胞系 血型糖蛋白A、H。 * 有特异性标志：选择一种即可，如CD3标记总T细胞； 没有明显的特异性标志：可以采用不同抗体组合，标记某种细胞。如Treg细胞公认的标志为CD4+CD25+FoxP3+. 表面分子标记可以与胞内分子标记相结合； 免疫荧光标记也可以与其它的标记方法相结合：如与CFSE 进行不同细胞亚群增殖分析。 * * 淋巴细胞亚群检测操作程序 一、实验原理： 人的淋巴细胞根据其生物功能和细胞表面抗原的表达可分为三大类：T淋巴细胞、B淋巴细胞和NK自然杀伤细胞。T淋巴细胞表达CD3；B淋巴细胞表达CD19；NK自然杀伤细胞表达CD56或CD16，并且不表达CD3。利用各种单克隆抗体与淋巴细胞表面抗原结合，再配多色荧光染料，即可以把淋巴细胞区分为各种亚型。进面得到各亚群的比例。 * 二、主要试剂： MultiTEST IMK Kit(美国BD Biosciences公司；CAT:340503)， 其中包括：1、CD3-FITC/CD8-PE/CD45-PreCP/CD4-APC 2、CD3-FITC/CD16+56-PE/CD45-PreCP/CD19-APC 3、FACSLysing Solution 三、实验操作： 1、标本采集：使用EDTA-K2抗凝真空采血管，抽取静脉血2ml。 2、染色和固定细胞： 标本管编号A，取两只流式专用管A1、A2。 A1管加入CD3-FITC/CD16+56-PE/CD45-PreCP/CD19-APC 20uL； A2管加入CD3-FITC/CD8-PE/CD45-PreCP/CD4-APC 20Ul。 A1、A2管中分别再加入全血100Ul，混均。 置室温，避光孵育15min。 加入FACSLysing溶血液2.0ml，置室温，避光孵育10min。 300g离心5min，弃上清液。 PBS洗涤细胞两次，300g离心5min，弃上清液。 1%多聚甲醛0.5mL。 3、上机检测；分析结果；打印实验报告。 * 流式细胞术胞内分子免疫标记操作流程 * 流式细胞术胞内分子免疫标记操作举例 B淋巴细胞胞内ZAP-70分子检测操作程序 * 主要试剂： * 【临床意义】 * 流式细胞术系列讲座之——免疫标记 * 流式细胞术的一般介绍 流式细胞术在临床检测和科研中的应用 * 流式细胞仪可检测的细胞参数 细胞结构 细胞大小 细胞颗粒性程度 细胞表面面积 核浆比例 DNA含量与细胞周期 RNA含量 细胞功能 细胞表面蛋白抗原 细胞胞浆内蛋白性抗原 细胞内细胞因子 细胞增殖 细胞内钙离子浓度 * 免疫标记技术（immunolabelling technique）:是指用荧光素、放射性同位素、酶、发光剂或电子致密物质等作为示踪剂，标记抗体或抗原进行的抗原抗体反应。 流式细胞术检测蛋白质分子：免疫荧光标记技术 * FACSCalibur流式细胞仪能够检测的荧光（Fluorescence）信号 FL1 （第一荧光） -FITC(异硫氰酸荧光素） FL2 （第二荧光） -PE（藻红蛋白） FL3 （第三荧光） -PerCP, PeCy5等 PL4 （第四荧光） -APC（藻青蛋白） 双色直接染色 * 检测细胞表面蛋白抗原 检测细胞胞浆内蛋白性抗原 检测细胞内细胞因子 优势：在同一细胞上同时检测多种标志 * * CD34+抗原在早期造血祖细胞内呈高水平表达，随着细胞成熟其表达呈进化性下降，继而消失。 CD38抗原是造血干细胞向多系定向分化的标志之一，并随一定的分化过程表达上调 最近发现CD90（Thy-1）是比CD34更早的干、祖细胞标志 结合多种分化抗原的表达可以作为造血细胞不同发育阶段的标志。 如CD34+、CD33+细胞群为多能干细胞向髓系定向的标志； CD34+、CD19+多为多能干细胞向B系定向的祖细胞。 CD34+、TdT+、CD10+、CD7+则被认为是向T系定向的祖细胞。 造祖/干细胞 * ??? T细胞及其亚群 T祖细胞（pro-T）的表型为CD34+、TdT+、CD10+、CD7+ 未成熟T细胞标志C