A离子的相对强度-生物探索.pptVIP

2、质谱仪的基本组成 ●基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF) （1）主要技术 基质辅助激光解吸电离(Matrix-assisted laser desorption/ionization, MALDI)技术 线性飞行时间质量检测器(time of flight，TOF) MALDI原理： 将分析物分散在基质分子(尼古丁酸及其同系物)中并形成晶体，当用激光(337nm的氮激光)照射晶体时，基质分子吸收激光能量，样品解吸附，基质－样品之间发生电荷转移使样品分子电离。基质的使用是这一电离技术的关键，基质吸收了激光的大部分能量并气化，同时将样品分子带入气相，样品分子只吸收少量激光能量，避免了分子化学键的断裂。基质在样品离子形成过程中充当了质子化或去质子化试剂，使样品分子带上正电荷或负电荷。 TOF原理 离子源中每一脉冲激光产生的离子先经过一个加速电场，获得动能，再进入一个高真空无电场飞行管道．离子在此无电场飞行管道内以在加速电场获得的速度飞行。质量较轻的离子飞行速度快，较早到达检测器，较重的离子飞行速度慢，较晚到达检测器，离子的飞行时间与其质荷比的平方根(m／z) 成正比，通过检测飞行时间来测定离子的质荷比。 3、运用生物质谱技术鉴定蛋白质 肽质量指纹谱(peptide mass fingerprinting，PMF)鉴定蛋白质 串联质谱（MS/MS）数据鉴定蛋白质技术 1）PMF鉴定蛋白质 （1）原理： 主要是利用蛋白质的各种属性参数(attribute parameter)如相对分子质量、等电点、序列、氨基酸组成、肽质量指纹谱等在蛋白质数据库中检索，寻找与这些参数相符的蛋白质。 用PMF鉴定蛋白质是目前蛋白质组研究中较为常用的鉴定方法．这一技术于1993年被多个研究小组分别独立提出，肽质量指纹谱是指蛋白质被酶切位点专一的蛋白酶水解后得到的肽片段质量图谱。由于每种蛋白质的氨基酸序列(一级结构)都不同，蛋白质被酶水解后，产生的肽片段序列也各不相同，其肽混合物质量数亦具特征性，所以称为指纹谱，可用于蛋白质的鉴定，即用实验测得的蛋白质酶解肽段质量数在蛋白质数据库中检索，寻找具有相似肽指纹谱的蛋白质。电泳胶上的蛋白质可被原位酶切或转印到PVDF膜上酶切得到肽混合物，经质谱分析得到PMF，检索数据库进行鉴定。还可以选取肽混合物中的某一肽段通过串联质谱测序鉴定 . （2）实验路线 （3）主要数据库 （4）示例 三、应用 1、在肿瘤研究中的应用 蛋白组学技术为肿瘤研究拓开了新的途径,该技术能够动态、整体、定量地观察肿瘤的发生、发展过程。组织或器官癌变后,所引起的蛋白质种类和(或) 数量的变化,通过比较正常和“病变”细胞或组织中蛋白质表达的数量、位置以及修饰状态等方面的差异,可以发现与病理改变相关的蛋白质和疾病特异性蛋白质。主要用于: ①肿瘤标记物的筛选及鉴定; ②肿瘤分类及早期筛查; ③肿瘤的疗效评估及预后判断; ④探索肿瘤的发生机制; ⑤已知肿瘤相关基因产物的研究。 示例——肝癌 示例——结肠癌 Roblick 等通过2－DE、肽质量指纹图谱(peptide mass fingerprinting ,PMF) 和MS 分析了15 例散在乙状结肠癌患者的正常组织、腺瘤组织、癌组织和转移瘤组织样本,并在患者内和患者之间进行了比较,发现112 个蛋白点异常表达,其中有72个蛋白质被鉴定,46 个在癌发展中上调,26 个下调。 另有人通过2－DE 和MALDI－TOF－MS 技术对结肠癌细胞系LIM1215作了蛋白质组学分析,发现 284 个蛋白质,其中包括 92个膜蛋白,且很多膜蛋白是此前2－ED 没有发现的。 对结肠黏膜恶性转化过程中蛋白质的变化情况,采用2－ED 技术分析了组织样本或细胞裂解物的蛋白质提取物,发现该肿瘤组织中有57 个蛋白有量的改变(降低或增高) ,对其中18 个蛋白进行了质谱鉴定,发现有9 个蛋白质在癌前病变和肿瘤组织中表达。 2、在药物研究中的应用 随着基因组学、组合化学和高通量筛选等现代科技的发展,以药物发现为中心的药物研究不断取得新的突破。特别是蛋白质组学这门新科学的发展,大大加速和简化了新药开发的过程。蛋白质组学作为一种全新的技术平台,正日益广泛地应用于药物研究中 1）药物靶点的发现与药物靶点的确认 药物进入机体后多是通过与特异的靶蛋白作用而发挥药效达到治疗作用的,蛋白质组学通过比较细胞或组织在健康或疾病状态下蛋白质数量或形态上的差异,建立蛋白质组图谱,并用相关软件对蛋白质图谱进行分析,发现疾病相关蛋白质,找到有效的药物靶点。 许多研究小组利用蛋白质组手段来研究白血病、肺结核、肝炎、慢性骨骼疾病、心血管疾病及肿瘤等对人类威胁较严重的疾病的新药靶,