薄层色谱法精编PPT课件.ppt

* 定量分析：直接测定法 1 目测法 样品经色谱分离后，直接观察所得斑点的大小和颜色的深浅，并与标准品在相同条件下展开所得到的一系列已知不同浓度的标准斑点相比较，而近似地判断样品中所测成分的含量。 2 仪器测定法 薄层色谱法（TLC) * 判断依据：Rf值 ①查找资料：影响Rf值的因素 吸附剂种类、活度、颗粒大小；展开剂纯度和极性；薄层厚度；点样量；展开方式、温湿度；展开槽中的预饱和状态等。 ②对照品比较法：常用。 1、定性鉴别 （四）薄层色谱法的应用范围 薄层色谱法（TLC) * ①对照品比较法： 杂质对照品制成一定浓度的溶液 样品制成一定浓度溶液 按相同的点样量点样 展开后观察斑点颜色深浅和大小 2、杂质检查（杂质限量检查） 薄层色谱法（TLC) （四）薄层色谱法的应用范围 * 如异烟肼中游离肼的检查： 肼是一种诱变剂和致癌物质，中国药典对异烟肼原料和注射用异烟肼中游离肼的检查均采用薄层色谱法。 检查方法　取本品，加水制成每1ml中含50mg的溶液，作为供试品溶液。另取硫酸肼加水制成每1ml中含0.20mg（相当于游离肼50μg）的溶液，作为对照溶液。吸取供试液10μl 与对照溶液2μl，分别点于同一硅胶薄层板（用羧甲基纤维素钠溶液制备）上，以异丙醇－丙酮（3:2）为展开剂，展开后，晾干，喷以乙醇制对二甲氨基苯甲醛试液，15min后检视，在供试品主斑点前方与硫酸肼斑点相应的位置上，不得显黄色斑点。 薄层色谱法（TLC)：例子 ①对照品比较法： * 薄层色谱法（TLC) （四）薄层色谱法的应用范围 ①对照品比较法 异烟肼中游离肼的检查： 观察在供试品溶液主斑点前方与对照品溶液主斑点相应位置，是否显示鲜黄色斑点。可知异烟肼片中游离肼的含量是否低于药典规定的限量。 2、杂质检查（杂质限量检查） * ②自身稀释对比法（杂质结构不明或无杂质对照品） 主成分溶液稀释制成一定浓度的溶液 样品制成一定浓度溶液 按相同的点样量点样 展开后观察斑点颜色深浅和大小 薄层色谱法（TLC) （四）薄层色谱法的应用范围 2、杂质检查（杂质限量检查） * 如地西泮中有关物质的检查： 取本品的细粉适量（约相当于地西泮200mg），加丙酮5ml,振摇，使地西泮溶解，滤过，取滤液作为供试品溶液；精密量取适量，加丙酮稀释成每1ml中含地西泮0.20mg的溶液，作为对照溶液。点样展开后，供试品溶液如显杂质斑点，与对照溶液的主斑点比较，不得更深。 薄层色谱法（TLC)：例子 ②自身稀释对比法（杂质结构不明或无杂质对照品） * ①目视比较法 对照品制成不同浓度的系列溶液 样品制成定量溶液 按相同的点样量点样 展开后观察斑点颜色深浅和大小 注：本法适用于近似含量的测定，误差±10% 3、含量测定 薄层色谱法（TLC) （四）薄层色谱法的应用范围 * ②仪器测定法 （1）吸收测定法 展开后的薄层，用一定波长单色光束进行扫描，记录其吸光度的变化，得到扫描曲线。 利用样品扫描曲线上峰高或面积与标准品相比较，可得出样品含量。 （2）荧光测定法 化合物本身有荧光或经过适当处理后生成荧光化合物者可测量其荧光强度而进行定量。 用薄层扫描仪（TLC Scanner）扫描定量，该方法已成为薄层定量的主要方法。 薄层色谱法（TLC) * 薄层扫描仪对色谱斑点进行扫描 用一束长宽可以调节的一定波长、一定强度的光照射到薄层斑点上进行整个斑点的扫描，用仪器测量通过斑点或被斑点反射的光束强度的变化从而达到定量的目的。? * 吸收测定法的分类 根据对光测定方式的不同，可分为两种： 透射法 反射法 透射法扫描 反射法扫描 L 光源；MC 单色器；P 薄层板； S 斑点； PD 光电检测器 * 　薄层色谱法在各个学科中的应用 ⑴食品和营养 　 ⑵药物和药物代谢 ⑶化学和化工 　⑷医学和临床 　⑸毒物分析和法医化学 　⑹农药　 * 取本品水蜜丸6g，研碎，或取小蜜丸或大蜜丸9g，切碎，加硅藻土4g，研匀。加乙醚40ml，低温回流1小时，滤过，滤液挥去乙醚，残渣加丙酮1ml使溶解，作为供试品溶液。另取丹皮酚对照品，加丙酮制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录Ⅵ B)试验，吸取上述两种溶液各10μl,分别点于同一硅胶Ｇ薄层板上，以环己烷－醋酸乙酯(3:1) 为展开剂，展开，取出，晾干，喷以盐酸酸性 5％三氯化铁乙醇溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的蓝褐色斑点。 （2005年版《中国药典》一部 401页） 一、六味地黄丸中丹皮