第六章 微生物的生长繁殖.ppt

* * * * * * * * * * * * * * * * * 恒浊培养 温度 温度 表1.5-2 （二）间接计数法(活菌计数法) 1、平板计数法: 将待测细菌样品先做10倍梯度稀释,然后取相应稀释度的样品涂布到平板中,培养一段时间后观察并记数生长的菌落数,最终根据细菌数和和取样量计算出细菌浓度. 2、液体计数法 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * （2）除细菌外还有大量无机悬浮物时 MLVSS挥发性悬浮物＝MLSS － W无 =细菌群体的干重量 细胞数目= MLVSS÷个体细菌的平均干重量 550 ℃ 下灼烧 称重 105~110 ℃下进 行干燥恒重 称重 MLSS W无 如活性污泥测定（以重量MLSS、MLVSS间接表示细菌数量） 一、间歇培养和生长曲线 二、连续培养 三、生长曲线在水处理中的应用 第二节、微生物的生长曲线 第二节、微生物的生长曲线 一、间歇培养和生长曲线 间歇培养是将一定量的微生物接种在一个封闭的、盛有一定量的液体培养基的容器内，保持一定的温度、pH和溶解氧量，微生物在其中生长繁殖；结果出现微生物数量由少变多，达到高峰后又由多变少，甚至死亡的变化规律。这就是细胞的生长曲线。 生长曲线的制作 将少量单细胞的纯培养，接种到一恒定容积的新鲜液体培养基中，在适宜条件下培养，每隔一定时间取样，测菌细胞数目。以培养时间为横坐标，以细菌增长数目的对数为纵坐标，绘制所得的曲线。 延滞期 对数期 稳定期 衰亡期 典型的生长曲线 （Growth curve） 其它名称：停滞期、调整期、适应期 ①.特点： 细胞数目不增加(生长速率常数R=0) 细胞形态变大或增长 代谢旺盛(RNA含量增加) 对外界不良条件敏感，（如氯化钠浓度、温度、抗生素等化学药物） ?.原因：适应新的环境条件，合成新的酶，积累必要的中间产物 1.延滞期（lag phase） 停滞期（迟滞期或适应期） ?. 影响因素 接种龄：即“种子”的群体生长年龄，即处在生长曲线上的哪一个阶段，这是一种生理年龄。 接种量：接种量的大小明显影响延滞期的长短。 种子培养基成分：接种到营养丰富的天然培养基中的微生物，要比接种到营养单调的组分培养基中的延滞期短。 ①. 特点： 生长速率常数最大，繁殖数 死亡数 代时短，即细胞每分裂一次所需的代时G（增代时间，generation time）或原生质增加一倍所需的倍增时间（doubling time）最短. 成分均匀 酶活力高，酶系活跃，代谢旺盛。 2.对数期（指数期） 2. 对数期（指数期） ②. 三个重要参数 2.对数期（指数期） ③应用意义： 由于此时期的菌种比较健壮，生产上用作接种的最佳菌龄； 发酵工业上尽量延长该期，以达到较高的菌体密度 食品工业上尽量使有害微生物不能进入此期; 是生理代谢及遗传研究或进行染色、形态观察等的良好材料。 3.静止期又称：恒定期或最高生长期 特点： 细胞数目不增加(R=0)，即处于新繁殖的细胞数与衰亡的细胞数相等，或正生长与负生长相等的动态平衡之中。 菌体产量达到了最高点，而且菌体产量与营养物质的消耗间呈现出一定的比例关系 细胞长、大 代谢旺盛(RNA含量增加) 诱导酶迅速合成 对不良条件敏感，抵抗力降低 产生原因： 营养物的耗尽 营养物的比例失调， 有害代谢废物的积累 （酸、醇、毒素等） 物化条件（pH、氧化还原势等）不合适; 应用 稳定期是以生产菌体或与菌体生长相平行的代谢产物，例如单细胞蛋白、乳酸等为目的的一些发酵生产的最佳收获期，也是对某些生长因子例如维生素和氨基酸等进行生物测定的必要前提。此外，由于对稳定期到来的原因进行研究，还促进了连续培养技术的设计和研究。 4.衰亡期 特点： ①细胞死亡数增加，死亡数大大超过新增殖的细胞数，群体中的活菌数目急剧下降，出现“负生长”。 ②细胞内颗粒更明显，细胞出现多形态、畸形或衰退形，芽孢开始释放。 ③因菌体本身产生的酶及代谢产物的作用，使菌体死亡、自溶等，发生自溶的菌生长曲线表现为向下跌落的趋势。 产生原因：生长条件的进一步恶化，使细胞内的分解代谢大大超过合成代谢，继而导致菌体的死亡 二.连续培养（continuous culture） 连续培养（continuous culture） ：在微生物培养的过程中，不断地供给新鲜的营养物质，同时排除含菌体及代谢产物的发酵液，让培养的微生物长时间地处于对数生长期，以利于微生物的增殖速度和代谢活性处于某种稳定状态。 1.连续培养原理 当微生物在单批培养方式下生长达到对数期后期时，一方面以一定的速度流进新鲜培养基