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- 2019-08-07 发布于安徽
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常见生物相容性实验汇总
细胞复苏
材料准备:
培养基、培养皿、70%酒精、一次性吸管、FBS、15ml50ml离心管
实验步骤:
先将培养基配好并复温,在15ml离心管中加入5ml培养基;准备37℃的水浴,取出冻存管后立即置于水浴中融化,确保细胞全部浸入液面,快速摇动,1min内使管内的细胞融化,注意不要让水没过管口,液氮会从口子喷出,小心。
把培养基融化后的管子用75%酒精擦拭消毒后,放入安全柜内操作。
小心打开冻存管,将细胞悬液转移到有培养基的15ml离心管中。
1200rpm离心3min,弃上清,加入6ml含10%FBS的完全培养基,转移至新培养瓶(小瓶6ml培养基,大瓶10ml培养基)中,做好标记(细胞类型、传代数、培养基、复苏时间、复苏人),置于CO2培养箱中37℃培养,培养24h后视情况换液。
复苏后细胞生长状况正常后,进行常规培养,最好在第二次传代后冻存若干管细胞,不可只取不存,在第三次传代后可用于细胞实验。
TIPS:
解冻细胞必须迅速,防止细胞低温损伤,慢冻速融。
细胞冻存管可能漏入液氮,解冻时冻存管中的气温急剧上升,可导致爆炸。
细胞传代(TE消化法)
实验前准备事项:
预热培养用液:把已经配制好的装有培养基、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴锅内预热(可以省去)。
用75%酒精擦拭双手,生物安全柜经过紫外线照射超过30min,实验
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