免疫学诊断方法.ppt

????免疫学诊断技术 包括 体液免疫检测技术——血清学技术 细胞免疫检测技术 第一节 体液免疫检测技术 ——血清学试验(抗原抗体试验) 种类：1．沉淀试验 2．凝集试验 3．补体参与的试验 传统试验 4．中和试验 5．标记抗体试验——新技术 一．体外抗原抗体反应的一般规律 1．高度特异性 异嗜性抗原与免疫血清之间 交叉性 肠道杆菌与免疫血清之间 解决办法： 将动物免疫血清中的多克隆抗体通过吸收试验，制成单因子血清 应用杂交瘤技术制备单克隆抗体 2．反应可逆性 PH 7.0 T 370C Ag+血清(Ab) Ag-Ab复合物 PH＜3 T＞600C 利用抗原抗体特异性结合反应的可逆性规律，建立亲和层析技术，纯化免疫纯的抗原或抗体 亲和层析技术提取免疫纯抗体示意图 3．反应二阶段性 第一阶段反应——形成Ag-Ab复合物 第二阶段反应——出现可观察的现象 4. 浓度和比例 一定浓度范围，一定电介质存在下，二者比例适当 二．抗原抗体反应结果受多因素影响 （1）免疫血清质量要好 注意： -空腹采血 -防止细菌污染——用具灭菌，无菌操作 -防止溶血——用具灭菌后干燥，防止酒精与血接触 -保存好血清——加适量防腐剂，2-80C保存 （2）电解质 稀释抗原、血清常用0.85%NaCl溶液（生理 盐水），但稀释禽类血清用6%～8%盐水更好。 作用：降低抗原抗体的电势，完成二步反应 （3）温度：40C～560C均可 温度低反应慢，温度高反应快。 最常用370C 30min （4）PH值 稀释抗原、血清的溶液PH6.0～8.0均可以，最常用PH7.0～7.2 通常抗原抗体蛋白的等电点都在PH6以下，若抗原或抗体溶液PH接近等电点，自身就会凝聚，出现非特异性的凝集或沉淀反应 为了稳定PH，故在抗原抗体反应中最好用PH7.0～7.2的磷酸缓冲液（PBS）作抗原抗体稀释液 ※因为抗原抗体反应结果受多因素影响，为了证实试验的准确性，故在试验中一定要设立阳性、阴性和空白对照 三．各类抗原抗体反应简介 （一）沉淀试验 0.85%NaCl 可溶性抗原 +免疫血清 出现沉淀现象 (血清蛋白、病毒) （抗体） 比例适合 沉淀原 沉淀素 比例不适合 不出现沉淀现象 容易过多 前带现象 （稀释） 比例不适合——不能完成第二步反应 ——带现象 1．环状沉淀试验 原理：小试管内，下层沉 淀素与上层沉淀原 在界面应形成白 色沉淀环。 用途：检测皮毛中的炭疽 杆菌抗原（Ascoli试验） 3．双向琼脂扩散（琼扩） 原理？ 操作步骤？ 结果判断： 4．对流免疫电泳 原理？ 操作步骤？ 结果判断： Ag Ab 特点：反应时间短，敏感性提高 用途：定性，已不多用（水貂阿留申病，以病 原Ag检测病貂血清中的抗体） （二）凝集试验 基本原理： 生理盐水 颗粒性抗原 + 相应抗血清 抗原颗粒凝集 (细菌、红细胞) 比例适合 凝集原 凝集素 过多 后带现象 （稀释