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遗传病基因诊断的基本质量控制 2003年6月第26卷第6期ChinJL丑bMed,June2003,Vol26L_No. 遗传病基因诊断的基本质量控制 杨元张思仲 迄今能进行基因诊断的遗传病已逾百种.在临床上,遗 传病基因诊断的范围主要包括:直接针对遗传病患者的临床 诊断;对遗传病家系中的易患个体进行症状前诊断与携带者 检出;对遗传病家系中的患病高风险胎儿的产前诊断.在国 外,针对部分常见遗传病已有一些比较规范的基因诊断程 序H.2】,而我国虽然遗传病的基因诊断工作已开展近20年, 但受检测技术的局限性,从业人员缺乏必要的培训及实验室 管理水平低下等因素的影响,严重制约了检测质量的持续提 高,因此健全与发展遗传病基因诊断的基本质量控制规范具 有相当重要的意义.此外,由于遗传病病种与病因的高度个 体化,目前世界上尚未形成一个通用的质量控制程序,尽管 如此,但在质量控制方面仍有许多基础性工作可开展. 一 ,遗传病基因诊断的室内质量控制 (一)实验室管理 1.人员配备与素质要求:遗传病基因诊断是一种综合性 极强的临床检测工作.建议该实验室应配备1名副高以上, 1名中级以上职称,具有医学背景的从事基因诊断的技术人 员与3名以上实验员.试验操作人员应接受过核酸的基本 结构与基因组知识,基因扩增和分子杂交基本原理,应用及 相关衍生技术,遗传病的临床表现,基本分子病因和基因诊 断原理和实验技能的培训,应初步具备正确判断结果和分析 问题的能力.在整个专业培训过程中,必须随时强调防止实 验室污染,并详细介绍可能的污染源,污染处置办法和防污 染措施.在目前缺乏全国性遗传病基因诊断统一资格认证 的情况下,建议参加卫生部临床检验中心组织的基因扩增检 测培训,并获得资格证书. 2.规范化操作程序的制定和执行:针对不同的病种制定 相应的操作程序是质量控制的一个重要环节,一个标准的操 作程序应包含:试验原理,试验目的与检测的适应证,试验标 本的采集与保存方法,使用试剂与标准对照,使用仪器,核酸 提取步骤,检测技术原理及具体步骤,质量控制措施,结果分 析与检测质量评价标准,检测结果的有效覆盖范围与方法的 缺陷,参考文献与试验人员设置.各实验室应根据自身的具 体情况加以完善,并定期对试验程序进行检查核对,以保持 持续改进.试验程序的制定必须形成书面文件形式,执行时 有试验记录.其次,试验仪器和用具使用程序的制定应形成 作者单位:610041成都,四川大学华西医院医学遗传室基因检 测中心 Email:yuan70323@263.net ? 385? . 讲座. 书面文件形式,以保证执行程序的连续性,避免操作人员的 更替对试验的影响. 3.设备配置与管理:遗传病基因诊断实验室应具备的基 本硬件条件包括核酸提取仪器,核酸体外扩增系统,核酸杂 交系统,核酸电泳系统等,条件允许情况下应尽量配置DNA 测序系统,毛细管电泳系统及荧光原位杂交系统等较新的检 测平台.为了防止污染,试验相关设备均应严格按检测空间 分区使用原则进行放置,切忌随意跨区搬动. 4.试剂管理:首先,基因诊断试剂可以小包装冻存在 一 20℃以下环境中,以防反复冻融导致试剂失效,并减少实 验室污染的机会.另外未拆封试剂,已部分使用试剂与临床 标本必须分为3个区域放置;其二,所有试剂均应严格登记 使用期限,严禁使用过期试剂.所有试剂的记录应保留以便 出现问题时可追溯.其三,试剂在使用前低温解冻,解冻后 应放于冰上,打开管盖前务必作低速瞬时离心,达到混匀和 防止试剂浪费,污染的目的. 5.病例资料管理:由于遗传病较多以家系形式出现,并 具有可传递的特点,因此家系中常有1个以上的待检者,且 检测的时间跨度较大.如进行产前诊断与携带者筛查都要 求实验室对病例资料进行妥善保存.以便需要时能及时调 用查阅准确资料,并保护待检者的隐私权.比较可行的办法 是将所有待检者的资料以病种与家系为单元储存在内部联 网的计算机系统数据库内,并设置严格的进入程序与密码, 在授权情况下,任一终端可以看到资料.资料应有计算机硬 盘外的电子拷贝与书面备份,以防意外丢失.如果资料由于 各种原因被更改,应及时书面解释原因,并与资料放在一起. (二)室内污染监控 1.实验室污染监测:在临床标本进行DNA提取时,必须 同步加1个阴性临床标本进行对照检测;在PCR扩增前,再 加1个阴性模板同步扩增.2个阴性标本任一出现阳性结 果都提示有PCR产物污染,需对实验室重新清洁,重复试 验. 2.实验室污染控制:第一,在PCR扩增中采用底物取代 法,即用dUTP取代dTrP,扩增前加入LING酶以避免既往产 物的污染是一个很好的方法.其次,实验室空间设置必须为 严格单向走动,每天30min以上近距离紫外灯照射.另外, 试验用具和仪器设备坚持每周1次稀酸擦拭