化学发光免疫技术.PPTVIP

化学发光免疫分析双抗体夹心法原理示意图 1.分离方法 常用磁颗粒分离技术，即用抗原或抗体包被磁颗粒，与标本中相应抗体或抗原及吖啶酯标记的抗体或 抗原通过一定模式的免疫学反应后,最终通过在磁场 中冲洗将结合到免疫复合物中的标记物和游离标记物 进行分离的技术。 二、方法类型 2.常用的免疫学反应模式 双抗原夹心法 固相抗原竞争法 双抗体夹心法 三、技术要点 抗原抗体结合反应 结合物与游离物的分离 (磁颗粒分离技术) 化学发光反应 化学发光酶免疫分析（CLEIA）是用参与催化某一化学发光反应的酶如辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶(ALP)来标记抗原或抗体，在与待测标本中相应的抗体(抗原)发生免疫反应后，经洗涤将结合物与游离的酶标物分离后，加入底物(发光剂)，酶催化和分解底物发光，由光量子阅读系统接收，光电倍增管将光信号转变为电信号并加以放大，再把它们传送至计算机数据处理系统，计算出测定物的浓度。 第三节 化学发光酶免疫分析 一、 检测原理 碱性磷酸酶化学发光酶免疫分析双抗体夹心法原理示意图 1.根据标记酶不同分类 可分为辣根过氧化物酶标记的化学发光酶免疫分析和碱性磷酸酶标记的化学发光酶免疫分析。前者常以鲁米诺或其衍生物作为发光底物，后者常以AMPPD作为发光底物。 2. 根据免疫学反应模式分类 同化学发光免疫分析，主要有双抗体夹心法、双抗原夹心法和固相抗原竞争法等主要模式，所不同只是相应抗原或抗体上标记的是酶而不是直接标记发光剂。 二、方法类型 三、技术要点 抗原抗体结合反应 结合物与游离物的分离 （磁颗粒分离法 、微粒子捕获法 、包被聚苯乙烯反应珠或孔分离法 ） 酶促发光反应 电化学发光免疫分析（ECLIA）是以电化学发光剂三联吡啶钌标记抗体(抗原)，通过抗原抗体反应和磁珠分离技术，根据三联吡啶钌在电极上发出的光强度对待测的抗原或抗体进行定量分析，它包括电化学和化学发光两个过程。 第四节 电化学发光免疫分析 一、 检测原理 人民卫生出版社 人民卫生出版社 人民卫生出版社 人民卫生出版社 人民卫生出版社 人民卫生出版社 人民卫生出版社 人民卫生出版社 * 免疫学检验 第二十一章化学发光免疫技术 1.化学发光剂的概念及常用的化学发光剂。 2.化学发光免疫分析的基本原理及其技术类 型。 3.化学发光酶免疫分析基本原理及其分离技 术。 4.电化学发光免疫分析基本原理。 5.化学发光免疫技术的临床应用。 本章要点 目　录 发光基本知识 1 化学发光免疫分析 2 化学发光酶免疫分析 3 电化学发光免疫分析 4 化学发光免疫技术的临床应用 5 化学发光免疫技术是将具有高灵敏度的化学发光测定技术与高特异性的抗原抗体反应技术相结合，用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、维生素和药物等的检测分析技术。该技术具有特异性高、灵敏度高、分离简便、 快速、试剂无毒、安全稳定、可自动化分析等特点，在免疫学检验中应用广泛。 前 言 放射免疫技术 酶免疫技术 荧光免疫技术 金免疫技术 化学发光免疫技术 标记免疫技术 第一节 基本知识 一、发光 发光是指分子或原子中的电子吸收能量后，由低能级的基态跃迁到高能级的激发态，然后再返回到基态，释放出的能量表现为光的发射。根据形成激发态的激发能不同可将发光分为光照发光、生物发光和化学发光。 1.光照发光（photoluminescence） 发光剂（荧光素）经短波长入射光照射后进入激发态，当回复至基态时发出较长波长的可见光。 2.生物发光（bioluminescence） 发生在生物体内的发光现象，如萤火虫的发光，反应底物为萤火虫荧光素，在荧光素酶的催化下，利用ATP产能，生成激发态氧化型荧光素，它在回复基态时多余的能量以光子的形式释放出来。 3.化学发光 某些物质(发光剂)在化学反应时，吸收了反应过程中所产生的化学能，使反应的产物分子或中间态分子中的电子跃迁到激发态，当电子从激发态回复到基态时，以发射光子的形式释放出能量，这一现象称为化学发光。 一个化学反应要产生化学发光现象，必须满足以下条件： ①该反应必须提供足够的激发能, 并由某一步骤单独提供, 因为前一步反应释放的能量将因振动弛豫消失在溶液中而不能发光 ②要有有利的反应过程, 使化学反应的能量至少能被一种物质所接受并生成激发态 ③激发态分子必须具有一定的化学发光量子效率释放出光子, 或者能够转移它的能量给另一个分子使之进入激发态并释放出光子 在化学发光反应中参与能量转移并最终以发射光子的形式释放能量的化合物称为化学发光剂或发光底物。 二.化学发光剂 作为化学发光免疫技术的化学发光剂应符合以下几个条件： 发光的量子产率高 物理-化学特性要与被标记或测定的物质相匹配 能与抗原或抗