蜜环菌提取工艺规 (1).docVIP

PAGE 第 PAGE 6 页 共 NUMPAGES 6 页 文件名称 蜜环菌发酵提取生产工艺规程 文件编号 制 定 人 制定日期 年 月 日 审 核 人 审核日期 年 月 日 批 准 人 批准日期 年 月 日 生效日期 年 月 日 颁发部门 版本号 颁发部门 GMP 委员会 验证 委员会 总 工 办 公 质 量 开 发 生 产 设 备 供 应 销 售 财 务 车 间 分发数量 目的 本规程是蜜环菌发酵提取的生产技术标准，使其生产技术管理科学化、规范化，保证产品质量。 范围 蜜环菌发酵提取 内容 1 产品概述 1.1蜜环菌浓缩液是脑心舒口服液的原料。本品为白蘑科植物蜜环菌，人工液体发酵的培养液，经浓缩滤过的液体。 1.2蜜环菌培养产物：本品为担子菌纲，白蘑科蜜环菌的发酵培养产物。本品每年进行一次以上复壮培养及菌丝检查。鲜品置显微镜下观察：在菌丝周围可见到棒状结晶体。菌索外部有一层质脆的鞘，鞘内为坚硬的白色或近白色的细长菌丝束。本品不得混有其他杂质，水分不得过10%，已发霉变质的培养产物，不得供药用。 1.3 功能与主治： 镇静安神、养肝止晕，活性祛风。用于眩晕，头痛、失眠、癫痫。 1.4 贮藏：密封，置阴凉处储存。 2 制法 2.1 蜜环菌液体深层发酵培养 2.1.1斜面菌种培养 试管菌种用PDA培养基培养将保存在冰箱中的优良菌株的试管种转入已制备好的PDA培养基中；在25-26 ℃培养15-20天，菌丝呈棕红色，边缘白色，在暗室可见荧光，有时长出稍卷曲、驼色气生菌丝、试管背面能见到长入培养基中白黄色的根状菌索、长出培养基外的菌索蹭红色或褐色。即转入种子培养基培养。 2.1.2种子培养 种子培养基配方为：麦麸（或马铃薯）煮汁5%，葡萄糖2%，磷酸二氢钾0.15%，硫酸镁0.075%，维生素 B 2.1.2.1一级种子培养：在500ml三角瓶100-150ml培养基液，灭菌后接入1支斜面菌种，用接菌铲切碎菌种，培养基温度为24-26 ℃.在 2.1.2.2二级种子培养：在5000ml三角瓶中装入1000ml种子培养基液，灭菌后接入一级种子，接菌量为10%，在卧室加高型大容量全温度恒温培养摇床培养72-96小时，转速120转/min，培养基温度为26-28 2.1.2 在种子发酵罐中，装入罐体积60-70%的培养基液，以120℃灭菌半小时，冷却以后以5%-10%接种量接入二级种子，在26-28℃温度下搅拌通气培养，搅拌速度为150-180转/min，通气量每分钟为1:0.3-1:0.5（v/v），培养96-120小时即可长好备用。 2.1.3发酵培养 是在发酵罐中进行的通气搅拌培养，发酵培养基与三级种子罐培养基相同。其培养条件与种子罐种子培养相同，灭菌后接入三级种子，接菌量为5-10%，搅拌速度为190转/min，培养168-192小时，当发酵液变为棕褐色、菌丝较密生长旺盛，有荧光，PH值下降至4-5，残糖量降至0.3%-0.5%静止培养后发酵液澄清透明，啤酒色，即可终止发酵。 2.1.4采收、过滤和浓缩 发酵终止后出罐，采用离心机或板框过滤，使菌体和滤液分开，滤液浓缩至相对密度1.030-1.035（20℃），即得蜜环菌浓缩液。 2.1.5 水沉 如果滤液浑浊，可采取水沉的方法处理。 2.2.3工艺流程图 25-26℃ 24-26℃ 试管斜面培养 500ml摇瓶种子培养 15-20天 120-148小时 25-26℃ 26-28℃ 5000ml摇瓶种子培养 种子罐培养 72-96小时 72-96小时 26-28℃ 发孝罐培养 板式过滤 滤液 160-190小时 相对密度 浓缩 蜜环菌浓缩液 1.030-1.035（20℃） 3.清场 各工序完成后彻底清场