鱼类急性毒性试验操作规范.doc

鱼类急性毒性试验操作规范（讨论稿） 国家环境总局 鱼类是水生食物链的重要环节，也是水体中重要的经济动物。鱼类毒性试验在研究水污染及水环境质量中占有重要地位。通过鱼类急性试验可以评价受试物对水生生物可能产生的影响，以短期暴露效应表明受试物的毒害性。因此在人为控制的条件下，所进行的各种鱼类毒性试验，不仅可用于化学品毒性测定，水体污染程度检测、废水及其处理效果检查，而且也可为制定水质标准、评价水环境质量和管理废水排放提供科学依据。 1. 受试物及必备资料 对于化学受试物，要求以下必备资料： 水溶解度 在水中和光中的稳定性 蒸汽压 pKa 值 结构式 正辛醇-水的分配系数 纯度 快速生物降解试验结果 水溶液中的定量分析方法 对于环境样品，采集样品时应将采样瓶充满水样不留顶上空间，样品采集后立即进行试验。如果样品采集后6h 之内不能进行试验，则必须将水样在0-4℃下保存，废水稀释浓度可用体积百分比表示。 2. 仪器设备 ①溶解氧测定仪。 ②水硬度计。 ③温度控制仪。 ④pH 计。 ⑤分析天平。 ⑥试验容器或装置：化学惰性材料制成的水族箱或水槽，规格一致，体积适宜。如使用流水试验装置，应具有控温、充气、流速控制等功能。 ⑦抄网：尼龙或其他化学惰性材料制成。对照组和试验组容器分用。 3. 受试生物种或材料 可选用一个或多个鱼种，根据需要自行选择。但建议结合相应得标准来确定鱼种：如全年可得、易于饲养、试验方便、相关的经济、生物或生态因素等。试验用鱼应健康，无明显畸形。还应考虑来源可靠稳定。建议受试物为化学品时采用表1 中的推荐鱼种；受试物为环境样品时，除可采用上述推荐鱼种外，亦可采用当地具有代表性的鱼种。如白鲢（Hypophthamichthys molitrix），鳙鱼（Aristichthys nobilis），草鱼（Ctenopharyngodonidellus），鲤鱼（Cyprinus carpio）等。 表1 推荐的实验用鱼及条件 鱼种 试验温度（℃） 试验鱼的全长（cm） 斑马鱼（Brachydanio rerio） 21-25 2.0±1.0 稀有鮈鲫(Gobiocypris rarus) 21-25 2.0±1.0 剑尾鱼(Xiphophorus helleri) 21-25 2.0±1.0 4.试验程序 准备 （1）供试鱼的驯养 ①供试鱼用于试验之前，必须在试验室至少暂养12d。临试验前，应在符合下列条件的环境中至少驯养7d： 水：与试验用稀释水水质相同； 光：每天12-16h 光照； 温度：与试验鱼种相适宜； 溶解氧浓度：高于空气饱和值的80%； 喂养：每周三次或每天投食，至试验开始前24h 为止。 ②驯养开始48h 后，记录死亡率，并按下列标准处理： 7d 内死亡率小于5%，可用于试验；死亡率在5%-10%之间，继续驯养7d 死亡率超过10%，该组鱼全部不能使用。 （2）试验用水 使用高质量的自然水或标准稀释水，也可以使用饮用水（必要时应除氯）。水的总硬度为10-250mg/L(以CaCO3 计)，pH 为6.0-8.5。 （3）标准稀释水的配制 配制标准稀释水，所用试剂必须是分析纯，用全玻璃蒸馏水或去离子水配制。 ①氯化钙溶液：将11.76g CaCl2·2H2O 溶解于水中，稀释至1L。 ②硫酸镁溶液：将4.93g MgSO4·7H2O 溶解于水中，稀释至1L。 ③碳酸氢钠溶液：将2.59g NaHCO3 溶解于水中，稀释至1L。 ④氯化钾溶液：将0.23g KCl 溶解于水中，稀释至1L。 蒸馏水或去离子水的电导率应≤10Μs/cm。 将这四种溶液各25ml 加以混合并用水稀释至1L。溶液中钙离子和镁离子的总和2.5mmol/L。Ca：Mg 的比例为4：1，Na：K 比为10：1。稀释用水需经曝气直到氧饱和为止，储存备用。使用时不必再曝气。 （4）试验溶液 ①将受试物贮备液稀释成一定浓度的受试物溶液。低水溶性物质的贮备液可以通过超声分散或其他适合的物理方法配制，必须时可以使用对鱼毒性低的有机溶剂、乳化剂和分散剂来助溶。使用这些物质时应加设溶剂对照组，其助溶剂含量应为试验组使用助溶剂的最高浓度，且不得超过100mg/L 或0.1ml/L。 ②不需调节试验溶液的pH。如果加入受试物后水箱内水的pH 有明显变化，建议加入前，调节受试物贮备液的pH，使其接近水箱内水的pH。调节贮备液的pH 时不能使受试物浓度明显改变，或发生化学反应或沉淀。最好使用HCl 和NaOH 来调节。 （5）暴露条件 时间：96h。 承载量：静态和半静态试验系统最大承载量为1.0g 鱼/L，流水式试验系统承载量可高一些。 光照：每天12-16h。 温度：与试验鱼种相适宜（见表 5-3-4），温控范围±2℃，对于较严格的试验温控±