色谱柱分类与选择_内部培训资料全.ppt

一、色谱起源 1906 年俄国植物学家Tsweet 发现色谱分离现象 2 高效液相色谱仪的分析原理 高效液相色谱仪的结构 色谱柱在高效液相色谱仪中的作用和峰形产生原理 高压泵 进样器 检测器 色谱工作站 色谱柱 1 Basic principle of chromatographic separation 1.1 色谱分离基本原理 Partition coefficient K分配系数 硅胶颗粒基质合成步骤： 1.合成硅胶基质 2.键合配体(键合相) 3.端基封尾 end-capped 以传统方式制造硅胶色谱填料的过程: 起始原料为矿物硅酸盐（如泡花碱），即A类硅胶 90年代以后方式：organosilica polymer 有机单晶硅聚合的硅胶，即B类硅胶 填料的端基封尾 –封口残余硅羟基 –减少不可逆吸附或拖尾 –增加碳含量（0.1% -1%） C18键合并端基封尾后 还能看见什么？硅羟基!—即使进行高密度键合，硅胶表面仍将残留约50%硅羟基(SiOH)! 单、双、三官能团键合 三官能团键合 二官能团键合 单官能团键合 键合 常用封尾end-capped ：三甲基硅氧烷 极性封尾，增加极性保留 Hypersil ODS即没有封尾 Hypersil ODS-2有封尾 由于空间位阻的存在，键合反应最多只能覆盖50%的硅羟基，超过一半硅羟基是活性硅羟基，与碱性基团会发生离子交换作用，增加了保留，导致峰形拖尾，用短链氯硅烷（如三甲基氯硅烷）键合活性的硅羟基，可以减小这种影响，这种操作被称为封尾，封端，封口。 封尾 封尾 空间位阻：异丙基硅氧烷，异丁基硅氧烷 空间位阻 极性嵌入 polar embedded 问题：下列色谱柱如何选择？ amidohexadecylsilyl silica gel Column: — size : l = 0.25 m, Ø = 4.6 mm; — stationary phase: diisopropylcyanopropylsilyl silica gel for chromatography R (5 μm) with a specific surface area of 180 m2/g and a pore size of 8 nm; — stationary phase: spherical octadecylsilyl silica gel for chromatography R (5 μm) with a specific surface area of 170 m2/g and a pore size of 12 nm. — stationary phase: aminopropylsilyl silica gel for chromatography R (5 μm), — stationary phase: end-capped octadecylsilyl silica gel for chromatography R (5 μm), — stationary phase: base-deactivated octadecylsilyl silica gel for chromatography R (3 μm). — stationary phase: octylsilyl base-deactivated silica gel for chromatography R (4 μm) with a pore size of 6 nm, — stationary phase: end-capped polar-embedded octadecylsilyl amorphous organosilica polymer R (5 μm); Mobile phaseMix 35 volumes of acetonitrile R and 65 volumes of a 5.23 g/l solution of dipotassium hydrogen phosphate R previously adjusted to pH 7.0 with phosphoric acid R. （答案见备注信息） 以传统方式制造硅胶（A类硅胶）色谱填料的过程: 起始原料为矿物硅酸盐（如泡花碱） Na2SiO3 (矿物) + 2H+ Si(OH)4 (silicic acid)+ 2Na+ 硅胶颗粒 (含金属杂质!) C18/C8 bonding + endcapping C18/C8 Reversed Phases (最终仍带金属杂质!) 与键合相的疏水性作用 双重保留机理:1). 与键合相的的疏水性作用; 2).