口服葡萄糖的耐量试验.ppt

口服葡萄糖耐量实验(OGTT) 主讲：向梦甜 PPT制作 ：向梦甜 其他：汪琪、楚兵兵、杜龙 付云 实验目的与要求 掌握酶法测定血清葡萄糖浓度的原理 掌握血糖变化的临床生理意义 掌握口服葡萄糖耐量试验的原理，适用人群和临床意义。 口服葡萄糖耐量试验（OGTT）是一种葡萄糖负荷试验，用于检查人体胰岛素B细胞功能和机体对糖的调节能力。正常人进食后血糖都会暂时性升高，30-60分钟后可升到最高峰，但一般不超过8.9mmol/L，2小时左右又会回到空腹水平。这种现象称为耐糖现象。若内分泌失调或神经系统功能紊乱，则调节功能失常，食入大量糖后血糖浓度可急剧上升，短时间不能恢复到原值，称为耐糖失常现象。所以观察耐糖现象可以了解调节血糖的各种机能是否健全。 实验原理 血糖的测定方法 测定方法 无机化学法 有机化学法 酶法 无机化学法：Folin-Wu法，基于葡萄糖醛基的还原性 Cu2+ OH- Cu+ Glu 磷钼酸 显色 特异性差 有机化学法：邻甲苯胺法、联苯胺法、氨基联苯法等 邻甲苯胺 + Glu 葡萄糖基胺 希夫氏碱 蓝绿色化合物 缩合 脱水 分子重排 干扰因素多 酶法：1、己糖激酶法（HK） 2、葡萄糖氧化酶法（GOD法） 血糖的测定方法 １、己糖激酶法（ＨＫ法） 原理： 葡萄糖＋ATP　ＨＫ　葡萄糖-６-磷酸＋ADP 葡萄糖-6-磷酸＋NADP＋ G-6-PD ６-磷酸葡萄糖内酯+NADPH NADPH在340nm有吸收峰，其吸光度增加与标本中的葡萄糖浓度成正比 评价：本法特异性高，灵敏度高，干扰因素少，适用于自动化 分析，为葡萄糖测定的参考方法，但是试剂较贵。 血糖的测定方法 血糖的测定方法 评价 ：操作简单，特异性较高，是血糖测定的首选方法．但溶血（血红蛋白）、四环素、尿酸、Vc、胆红素、 GSH可引起测定结果负偏差。 2、葡萄糖氧化酶法(GOD) 葡萄糖＋O2+H2O GOD 葡萄糖酸内酯＋2Ｈ2O2 2Ｈ2O2 + 4-氨基安替比林+酚 POD 红色醌类化合物 + Ｈ2O +O2 血糖的测定方法总结 血糖的测定方法按测定原理可分为无机化学方法、有机化学方法和生物化学方法三类。此外，还有固相酶法、电化学法及质谱法等。常用的是分光光度法和酶学方法。分光光度法中常见的是邻甲苯胺法，是利用葡萄糖在加热的有机酸溶液中与某些芳香族胺类，可生成有色衍生物这一原理建立的。酶学方法有葡萄糖氧化酶法、己糖激酶法和葡萄糖脱氢酶法等。 临床上OGTT主要适用情况 （1）无糖尿病症状，空腹血糖异常，或偶尔出现糖尿，或有明显糖尿病家族史者 （2）有糖尿病症状，血糖水平不够糖尿病诊断标准者 （3）妊娠期或甲状腺功能亢进出现糖尿者 （4）不明原因肾病与视网膜病者。 实验器材：5mL移液管、50或100uL微量可调式移液器、721E分光光度计、1cm比色皿、37℃恒温水浴锅 应用GOD-POD法测定血糖浓度来检测葡萄糖耐量 应用GOD-POD法测定血糖浓度来检测葡萄糖耐量 实验试剂： 1、0.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH=7.0）:称取无水磷酸氢二钠8.67g及无水磷酸二氢钾5.3g溶于蒸馏水800ml中，调pH7.0，定容至1L。 2、酶试剂:取过氧化物酶12000U，葡萄糖氧化酶1200U，4-氨基安替比林10mg，置4℃保存，可稳定存放3个月。 3、酚溶液:称取重蒸馏酚100mg溶于蒸馏水100ml中，用棕色瓶贮存。 4、酶酚混合试剂:将酶试剂及酚溶液等量混合，4℃可以存放1个月。 应用GOD-POD法测定血糖浓度来检测葡萄糖耐量 5、12mmol/L苯甲酸溶液：取苯甲酸1.4g，于800ml蒸馏水中加温助溶，冷却后加蒸馏水定容至1L。 6、葡萄糖标准贮存液（100mmol/L）：称取已干燥恒重的无水葡萄糖1.802g，溶于约70ml 12mmol/L苯甲酸溶液中，以12mmol/L苯甲酸溶液定容至100ml。2h后方可使用。（防止氧化的作用 ，葡萄糖为单糖，含醛基，易氧化成羧基，加入苯甲酸，平衡向左移动 ） 7、葡萄糖标准工作液（5mmol/L）：吸取葡萄糖标准贮存液5.00ml放于100ml容量瓶中，用12mmol/L苯甲酸溶液稀释至刻度，混匀。 实验步骤 受试者前三天正常饮食，停用影响血糖的各种药物，如胰岛素、肾上腺皮质素、儿茶酚胺等。试验前1天晚餐后即不再进食（即空腹10~14小时）。 次日清晨空腹抽静脉血2ml（称为空腹血浆血糖，即FPG），然后将75g葡萄糖溶于200 ~300ml温开水中（儿童按每千克体重1. 75g），令受试者5min内服 下。服后半小时