饲料用酶的研究进 姚斌.pptVIP

中国农业科学院饲料研究所杨培龙 姚斌 2009年10月18日 饲料用酶制剂 饲料用酶种类 饲料用酶的意义 饲 料 用 酶 现 状 原 因 原 因 国内外差距 国内外差距 研发趋势 研发趋势 我们的研发和产业化进展 中国农业科学院饲料研究所微生物工程研究室简介 成立于1994年 国内饲料科学研究中第一个分子生物学和基因工程实验室。 研究内容: 饲料和工业用酶及其它生物活性物质的研发 动物胃肠道微生物及基因的分子生态 鱼的分子免疫与基因工程疫苗 饲料用酶的研究平台 技术平台的建立 新酶及基因的高通量筛选平台技术 有效的分子改良平台技术 高效表达平台技术 发酵技术和规模化生产技术 基因资源 新酶、新基因的高通量筛选 特殊环境 冰川土样 雪莲根部土样 地方羊品种瘤胃 草鱼胃肠道 天牛胃肠道 深海鱼胃肠道 棉桨废水 金属矿废水 热泉 火焰山土样 主要结果 基本建立了从特殊环境中快速筛选新酶编码基因的有效方法体系 构建了一种无需建库和分离微生物而直接从环境基因组中克隆全长基因的方法 研究了10余种特殊环境的微生物多样性 分离到300株以上的产目标酶酶微生物，其中有5个新种，10余个潜在的新种 研究了8种目标酶在多个特殊环境中的基因多样性 克隆到了超过2000个的目标酶基因片段 克隆到了300个以上的全长新基因 主要结果 筛选到了大量的性质各异、具有重要应用价值的酶及基因 可加深我们对酶关键性质与结构功能的了解, 指导进一步的分子改良 综合性质极为优良的植酸酶、木聚糖酶、b-甘露聚糖酶等 具有特殊性质的酶: 如低温酶、高温酶、高比活性酶、强酸性酶、强碱性酶、抗蛋白酶降解的酶等 雪莲根部土壤低温脂肪酶基因片段进化树图谱 冰川土样中第10族木聚糖酶多样性分析 结构具有特点的植酸酶基因 类似于操纵子的Erwinia herbicola E3植酸酶基因结构 结构具有特点的植酸酶基因 来源于Pseudomonas fluorescens 206串联的植酸酶结构 结构具有特点的植酸酶基因 多个磷代谢相关结构域的N. punctiforme 植酸酶基因 综合性质优良的植酸酶 Y4 在低pH值和强胃蛋白酶下高效水解植酸的Y. rohdei 植酸酶(猪专用植酸酶) 具备三个必要条件 在强酸性条件下有高活性 强酸稳定性 高浓度胃蛋白酶抗性 该酶同样具有高比活，高的表达量 是猪用植酸酶最好的候选者 最适pH比较 pH稳定性比较 胃蛋白酶抗性比较(标准方法) 具有低温活性的E. carotovora植酸酶 具有低温酶典型特性 低温时高的活性 差的热稳定性 在零度时具有5%的活性 最适活性温度，与动物体温相近 首次报道的低温植酸酶 是研究植酸酶结构的优良材料 来源于藻类的中性植酸酶 最适钙离子浓度1.5 mM 最适pH 6.5 最适温度50oC 具有典型BPP植酸酶的特性 钙离子对该植酸酶的热稳定性和酶活性是必须的 瘤胃中性植酸酶CP53 首次从宏基因组中通过改进的TAIL的方法克隆到一致性低的新基因 与报道的CP基因有不同的pH特性（6.5 VS 4.5）, 增加了对的CP植酸酶认识 在中性条件下具有高活性为CP植酸酶的应用研究提供更多的拓展空间 综合性质优良的木聚糖酶 高温强酸性木聚糖酶 多个pH峰的木聚糖酶和葡聚糖酶 低温磷脂酶LIPA 嗜酸性淀粉酶 AMY2 具有高角蛋白降解活性的蛋白酶 高效a－半乳糖苷酶(豆粕降解) α-Galactosidase with high efficiency to release galactose from soybean W/O trypsin 具有强嗜酸性的甘露聚糖酶 抗金属离子的甘露聚糖酶MAN5A 在SGF下有高活性的乳糖酶 对饲料有害真菌有抗菌活性的b-1,3-葡聚糖酶 酶的分子改良 分子改良技术 DNA改组 定点突变 基因杂合 全新设计 突变酶筛选技术 主要结果 突变酶表达筛选系统-木聚糖酶-突变酶胞外表达系统 植酸酶Y3的pH改良 植酸酶Y5的突变体 木聚糖酶的热稳定性改良 木聚糖酶的比活性改良 达到领先水平的表达技术 高效表达技术 综合以下手段 目标基因的优化：密码子、二级结构、自由能等 启动子改良、多启动子组合 信号肽改良 分子伴侣 解决溶氧的血红蛋白 能稳定遗传和表达的多拷贝技术 整合位点的控制 高效表达：高效生物反应器 构建了特有的稳定、高效的毕赤酵母表达系统，其特点和优势在于： 单位表达量更高。尤其对以往在原始毕赤酵母中表达量较低的外源基因可大副度提高其表达量 多种蛋白表达量达到了5mg/mL以