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SILAC定量技术方案 一 样品制备 1. 细胞培养和蛋白提取 (1). MEM培养基的准备( ①制备氨基酸储液：分别在20mL L-Arginine缺陷型MEM培养基中配置0.30mM(50%正常浓度)的13C6 L-Arginine hydrochloride和13C6, 15N4 L-Arginine hydrochloride储存液( ②分别加入20mL除菌后的氨基酸储液、10%的透析胎牛血清、1%的青链霉素、2mM的L-Glutamine和2mM的丙酮酸钠并用缺陷型MEM培养基定容到400 mL，贮存于4°C 每种完全培养基中的氨基酸浓度见表4-1： 表4-1 MEM培养基中轻、中、重L-Arginine的浓度 Cell lines Amino Acids M. W. Culture Media Amount(concentration) A L-Arginine 174.2 RPMI 1640 241.9 mg/L ( B 13C 216.7 MEM 65.0 mg/L ( C 13C6, 15N4 220.7 MEM mg/L ( (2). 细胞培养 将A、B、C三种细胞复苏后，分别接种于10cm培养皿中，在常规RPMI 1640培养基(添加10%的透析胎牛血清和1%的青链霉素)中培养HL-7702，分别使用仅含有13C6 L-Arginine hydr