松褐天牛OBPs基因克隆与分析.pdfVIP

华中农业大学2014届硕士研究生学位(毕业)论文 3．1．3实验仪器…………………………………………………………………21 3．1．4松褐天牛eDNA的获取…………………………………………………21 3．1．5松褐天牛OBPsPCR扩增及其产物的获取……………………………22 3．1．6松褐天牛OBPs序列分析………………………………………………25 3．2结果与分析……………………………………………………………………．25 3．2．1松褐天牛OBPs的RT-PCR扩增………………………………………．25 3．2．2松褐天牛OBPs基因序列分析…………………………………………25 3．3讨论………………………………………………………………………………………………………29 1 4。l材料与方法……………………………………………………………………一3 4．1．1主要菌株、试剂盒和试剂………………………………………………31 4．1．2荧光结合气味物质………………………………………………………32 4．1．3主要仪器…………………………………………………………………32 4．1．4质粒提取…………………………………………………………………32 4．1。5原核表达载体的构建……………………………………………………34 4．1．7 SDS．聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS．PAGE)……………………………35 4．1．8融合蛋白表达条件优化…………………………………………………35 4．1．9融合蛋白大量表达………………………………………………………35 4．1．10融合蛋白纯化…………………………………………………………．35 4。1．1l融合蛋白切除GST标签………………………………………………36 4．1．12蛋白过GST亲和层析柱………………………………………………36 4．1．13蛋白浓度的测定………………………………………………………．36 4．1．14荧光探针适合性测定…………………………………………………．37 4．1．15荧光竞争结合试验……………………………………………………．37 4．1。16荧光竞争结合实验数据分析…………………………………………．37 4．2结果与分析……………………………………………………………………．38 4．2．2松褐天牛OBPs融合蛋白表达…………………………………………38 4．2．3 II 松褐天牛OBPs基因克隆与分析 4．2．4 4．2．5 4．2．6探针适合性检验…………………………………………………………．39 4．2．7 4．3讨{念………………………………………………………………………………………………………．46 第五章结语……………………………………………………………………………．48 5．1主要结果………………………………………………………………………。48 5．2展望………………………………………………………………………………………………………48 攻读硕士学位期间发表的学术论文……………………………………………………64 致谢…………………………………………………………………………………………………………………。65 llI 松褐天牛OBPs基因克隆与分析 摘要： and 松材线虫Bursaphelenchusxylophilus(Steiner aIternatus 松褐天牛Monochamus Hope是松材线虫病在中国的主要传播媒介，控制松 褐天牛是防治松材线虫病的主要手段。松褐天牛属蛀干性害虫，幼虫生活隐蔽，传 统的防治方法难以奏效，目前利用引诱剂进行防治