氨基酸(aminoacidaa)含量测定试剂盒使用说明.pdfVIP

氨基酸(amino acid, AA)含量测定试剂盒使用说明 分光光度法 注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。 货号: BC1570 规格:50T/48S 产品内容： 试剂一：液体×1瓶，4℃保存。 试剂二：液体×1瓶，4℃保存。 试剂三：粉剂×1瓶 （棕色），4℃避光保存。临用前加入2mL无水乙醇，盖紧后充分混 匀，再加入28 mL蒸馏水混匀，避光保存。 试剂四：粉剂×1管，4℃避光保存。临用前加 10mL蒸馏水，充分溶解。 标准品：液体×1支，1μmol/mL标准液，4℃避光保存。 产品说明： 动物肝脏、肾脏是氨基酸代谢的主要器官，故尿中氨基酸的变化最能反应肝、肾的生理 状态。另外，氨基酸还能反应灼伤、伤寒等方面情况。植物体内氨基酸含量对研究植物在不 同条件下及不同生长发育时期氮代谢变化、植物对氮素的吸收、运输、同化及营养状况等有 重要意义。 氨基酸的α-氨基可与水合茚三酮反应，产生蓝紫色化合物，在570nm有特征吸收峰； 通过测定570 nm吸光度，来计算氨基酸含量。 自备仪器及用品： 台式离心机、水浴锅、紫外分光光度计、1ml玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵、无水 乙醇、冰和蒸馏水。 操作步骤: 一、样品中AA提取： 1. 按照组织质量 （g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例 （建议称取约0.1g组织，加入1mL 试剂一）进行室温匀浆，然后转移到1.5 mL EP 管中，盖紧后 （防止水分散失）置于沸 水浴提取15 min；自来水冷却后，8000g，，4℃离心10min，上清液置冰上待测。 2. 细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量 （104个）：试剂一体积 （mL）为500~1000：1的比例 （建议500万细菌或细胞加入1mL试 剂一），超声波破碎细菌或细胞 （冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30 次）；8000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。 3. 血清等液体：直接检测。 二、测定操作： 1. 分光光度计预热30 min，调节波长到570 nm，蒸馏水调零。 2. 空白管：取EP管，加入50μL蒸馏水，500μL试剂二，500μL试剂三和50μL试剂四， 混匀后盖紧瓶盖 （防止水分散失），置于沸水浴中保温15min，冷却后反复颠倒EP管数次， 于570nm测定吸光值，记为A空白管。显色后务必在30min 内测完。 3. 标准管：取EP管，加入50μL标准品，500μL试剂二，500μL试剂三和50μL试剂四， 混匀后盖紧瓶盖 （防止水分散失），置于沸水浴中保温15min，冷却后反复颠倒EP管数次， 于570nm测定吸光值，记为A标准管。显色后务必在30min 内测完。 4. 测定管：取EP管，加入50μL上清液，500μL试剂二，500μL试剂三和50μL试剂四， 混匀后盖紧瓶盖 （防止水分散失），置于沸水浴中保温15min，冷却后反复颠倒EP管数次， 于570nm测定吸光值，记为A测定管。显色后务必在30min 内测完。 注意：空白管和标准管只需要测定一次。 三、氨基酸含量计算公式： （1） 按蛋白浓度计算 氨基酸含量 （μmol /mg prot） [C标准品×V标准品×(A测定－A空白)÷(A标准－ A空白)]÷ （V样×Cpr） 1×(A测定－A空白)÷(A标准－A空白) ÷Cpr （2） 按样本质量计算 氨基酸含量 （μmol/g） [C标准品×V标准品×(A测定－A空白)÷(A标准－A空白)] ÷ （V样总÷V样）÷W 1×(A测定－A空白)÷(A标准－A空白) ÷W （3） 按细胞数量计算 氨基酸含量 （μmol /10 cell） [C标准品×V标准品×(A测定管－A空白管)÷(A标4 准管－A空白管)] ×（V样总÷V样×细胞数量） 1×(A测定管－