碧波annexin vegfp细胞凋亡检测试剂盒说明书.docVIP

For Research Use Only 碧波Annexin V-EGFP细胞凋亡检测试剂盒 Cat Number： Specification： Store at: -20℃ for one year Expire date： MADE BY BIOBOX 碧波Annexin V-EGFP细胞凋亡检测试剂盒 一、产品简介 Annexin是一类广泛分布于真核细胞细胞浆内钙离子依赖的磷酯结合蛋白，参与细胞内的信号转导。Annexin V选择性结合磷酯酰丝氨酸(phosphatidylserine，简称PS)。磷酯酰丝氨酸主要分布在细胞膜内侧，即与细胞浆相邻的一侧。在细胞发生凋亡的早期，不同类型的细胞都会把磷酯酰丝氨酸外翻到细胞表面，即细胞膜外侧。磷酯酰丝氨酸暴露到细胞表面后会促进凝血和炎症反应。而Annexin V和外翻到细胞表面的磷酯酰丝氨酸结合后可以阻断磷酯酰丝氨酸的促凝血和促炎症反应活性。因此Annexin V被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。用带有绿色荧光的荧光探针EGFP标记的Annexin V，即Annexin V-EGFP，就可以用流式细胞仪或荧光显微镜非常简单而直接地检测到磷酯酰丝氨酸的外翻这一细胞凋亡的重要特征。与FITC的绿色荧光信号相比，EGFP的绿色荧光信号具有信号强，不易淬灭，稳定性高等优点。 Annexin V-EGFP细胞凋亡检测试剂盒(Annexin V-EGFP Apoptosis Detection Kit)是用EGFP标记的重组人Annexin V来检测细胞凋亡时出现在细胞膜表面的磷酯酰丝氨酸的一种细胞凋亡检测试剂盒。可以使用流式细胞仪、荧光显微镜或其它荧光检测设备进行检测。 本试剂盒还提供了碘化丙啶染色液，碘化丙啶可以染色坏死细胞或凋亡晚期丧失细胞膜完整性的细胞，呈现红色荧光。对于坏死细胞，由于细胞膜的完整性已经丧失，Annexin V-EGFP可以进入到细胞浆内，与位于细胞膜内侧的磷酯酰丝氨酸结合，从而也使坏死细胞呈现绿色荧光。因此将Annexin V与PI匹配使用，就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。 二、试剂盒组份 组份 Cat:BB1210 10 assays Cat:BB1220 20 assays Cat:BB1250 50 assays Cat:BB12100 100 assays 储存条件 Annexin V-EGFP 50μL 100μL 250μL 500μL 4℃避光 结合液 5.0 mL 10 mL 25 mL 50 mL 4℃ 碘化丙啶 （PI） 50μL 100μL 250μL 500μL 4℃避光 三、试剂盒以外自备仪器和试剂 流式细胞仪或荧光显微镜、低速离心机、移液器 1.5m L离心管、载玻片、盖玻片、PBS、不含EDTA的胰酶消化液 四、保存条件： 4℃保存，Annexin V-EGFP和碘化丙啶染色液需避光保存，一年有效。为长期保存，可以把Annexin V-EGFP和碘化丙啶染色液适当分装后-20℃保存，Annexin V-EGFP结合液可以直接-20℃保存。 五、注意事项： 1、如果有细菌或真菌污染，会严重影响检测效果。 2、染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。 3、荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。 4、需自备PBS。 5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 6、本试剂盒适用于检测活细胞，流式细胞仪检测时，细胞数量不以应低于1×105，，不适用于检测组织样本。 7、因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同，因而流式检测的荧光补偿也不同，因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照，进行荧光补偿的调节。 8、用流式细胞仪检测，激发波长Ex=488 nm; 发射波长Em=530 nm。Annexin V-EGFP的绿色荧光通过FITC通道（FL1）检测；PI红色荧光通过PI通道（FL2或FL3）检测，建议使用FL3。荧光补偿调节：使用未经凋亡诱导处理的正常细胞，作为对照进行荧光补偿调节去除光谱重叠和设定十字门的位置。 六、操作规程 1、对于悬浮细胞： A、在进行完细胞凋亡刺激后，1000g (约1000-2000rpm) 离心5分钟，弃上清，收集细胞，用PBS轻轻重悬细胞并计数。（注意：PBS重悬不能省略，PBS重悬的过程同时也起到了洗涤细胞的作用，可以保证后续Annexin V-EGFP的结合。） B、取1~5×105重悬的细胞，1000g离心5分