微生物的应用绪言及实验1-大肠杆菌的培养与分离2016.ppt

第一部分 :微生物的应用 微生物的用途： 放线菌、霉菌：提取抗生素 酵母：发酵制酒 红曲霉、毛霉：发酵制作腐乳 微生物还能用于治理环境污染， 在新能源领域也将发挥巨大作用。 2.不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方 细菌喜荤，霉菌喜素 大肠杆菌配方：酵母提取物0.25g 蛋白胨0.5g Nacl?0.5g 水:50ml （琼脂1g） 一般细菌培养基：pH中性偏碱环境 酵母提取物和蛋白胨、一定量NaCl维持渗透压???? 一般霉菌培养基：中性偏酸环境 无机物配制或添加蔗糖的豆芽汁 固体培养基和液体培养基、半固体培养基。 1.培养基的类型 成分区别:琼脂(作用:凝固剂) 一、 培养基 ★ 细菌的培养 3.不管哪种培养基，一般都含有水、碳源、和氮源、 无机盐、生长因子等营养物质，另外还需要满足微生物生长对pH 、氧气、渗透压的要求． 2.不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方 一、 培养基 1.培养基的类型 ★ 细菌的培养 4.培养基的用途 液体培养基： 固体培养基： 纯化(分离)，鉴定、保藏菌种 扩大培养 (扩增)细菌、工业生产 分离后，一个菌体就会形成一个菌落。 单菌落的分离是消除污染杂菌的通用方法，也是用于筛选高表达量菌株的最简便方法之一。 有划线分离法和涂布分离法 单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。 菌落是鉴定菌种的重要依据。 二 菌落 三 无菌技术 1.无菌技术的概念 泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。 它是成功培养微生物的关键。 2.消毒与灭菌的概念及两者的区别 消毒是指杀灭大部分病原微生物的方法。 灭菌是指杀灭或清除环境中一切微生物（包括芽胞、孢子)的方法 3.常用的消毒与灭菌的方法 消毒的方法： 1)100℃煮沸5-6min 2)巴氏消毒法：70-75 ℃下煮30min或 80 ℃ 下煮15min 3)用75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒 4)氯气消毒水源 5)紫外线消毒 …… 灭菌的方法： 1)灼烧灭菌：即在火焰上灼烧以灭菌 2)干热灭菌：干热灭菌箱 160-170 ℃下加热1-2h。 3)高压蒸气灭菌：高压蒸汽灭菌锅 100kPa、121 ℃下 维持15-30min. 各种培养皿，试管，锥形瓶，接种环，镊子等通常都用此法先灭菌再用。 1、灼烧灭菌 灭菌的方法： 人们在培养细菌时需要将已有的细菌的培养物转移到新的培养基中，一般用 接种环转移带菌的培养物。 1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？ 2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。 （1） 培养细菌用的培养基与培养皿 （2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管 （3） 实验操作者的双手 无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。 （1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。 ★ 细菌的分离 1、划线分离法 ★ 细菌的分离 1、划线分离法 由于划线过程中接种环上的菌液逐渐减少，因此划线最后部分的细菌间距加大。细菌就会单个或少数几个分离出来。 将接种后的固体培养基培养10-20h后，一个细菌细胞就会繁殖成一个菌落（许多个细菌细胞）。 2、涂布分离法 将培养的菌液稀释，取0.1mL不同稀释度的菌液加在培养基上，用玻璃刮刀涂布在培养基平面上，然后进行培养。在适当的稀释度下，可培养得到相互分开的聚落，通常以有20个以内的但菌落最为合适。 操作简单 更易分开，操作复杂 实验目的: 1.进行大肠杆菌的扩增，利用液体培养基进行细菌扩大培养的操作 2.进行大肠杆菌的分离,用固体平板培养基进行细菌的划线培养 3.说明大肠杆菌培养的条件和操作要求的原理 大肠杆菌 革兰氏阴性 兼性厌氧 一些菌株对人体有害，侵袭肠粘膜并产生毒素。 但任何大肠杆菌若进入人的泌尿系统都会对人产生危害。 革兰氏染色 一种用于细菌的染色法 将细菌分为两类，即革兰氏 阳/ 阴 性菌。 用革兰氏染液染色后，再用脱色液处理， 细菌仍保留染色液的颜色就是革兰氏阳性。 大肠杆菌的用途： 基因工程技术中被广泛采用的工具 如用大肠杆菌工程菌生产rhGM-CSF rhGM-CSF 名称：重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 作用：一种蛋白质，很少（微克级）量即可提高人的白细胞含量，是目前放疗和化疗中的必用辅助药物。 实验用具 LB固体培养基 大肠杆菌菌液 （LB液体培养基） 培养皿 接种环 酒精棉