波普分析蛋白质环化.pptVIP

* * * * * * * * 天然蛋白质通过内部共价键环化折叠而稳定 READY? Now Loading… 主讲： 翻译： PPT制作： 课题的提出 问题解决方法 得到的结论 问题与展望 蛋白质骨架环化是一种可在解叠状态减少构象熵值的新方法。蛋白质的 N 端和 C 端生成一个天然的肽键，达到蛋白质环化的目的。天然蛋白质由于环化内部缺少张力，其稳定的自由能源于出现变性使得蛋白质环化的构象熵减少。对于氨基酸序列相同的线型和环形蛋白质，其伸展的自由能ΔG不一样，环化减小蛋白质的构象熵值，从而使环形蛋白质更加稳定。 蛋白质环化：通过灵活的蛋白质环化链接实验，引入构象张力来定量评估环化蛋白质！！！ 问题解决方法 蛋白质单体样品的制备： 1.二聚体链接处带电的谷氨酸代替苯丙氨酸 2.用核磁共振测定质子迁移速率。 3.为了获得相同的氨基酸序列重新设计lin-DnaBN(F102E)和cz-DnaB-N(F102E)。 DnaB-N的突变体（残基24-136）：其构造和研究是通过圆二色性和电离质谱来定量评估对环化的影响。 DnaB-N的N端和C端三维空间结构和天然蛋白质的核心结构在空间是接近的，这样的结构允许通过小的、灵活的缩氨酸缓和而不影响中心结构。已经通过NMR和结晶方法确定结构DnaB-N是一个完全螺旋的单体蛋白质，如图所示。 问题解决方法 箭头标识突变的