全内反射荧光成像基本原理.pptxVIP

全内反射荧光成像基本原理 TotalInternalReflectionFluorescence(TIRF) ;全内反射荧光显微镜(TIRFM); 目前用于单分子研究的检测技术主要有两大类：扫描探针显微技术（SPM）和光学技术。其中： ; 上世纪80 年代，Axelrod 等生物物理学家对 TIRFM 技术及基本原理进行描述，并探索了其在生物方面的应用。;光反射和折射示意图;全内反射示意图;; 当入射角不断增大，透射角为增大 90°时，入射角达到临界角 θc。依据 Snell 定律得出：; 实际上，由于光的波动效应，有一部分光的能量会透过临界面渗透到水溶液中，平行于界面向水溶液中传播，这一部分透过的能量场则称之为“隐失波” 或“隐失场”。; 隐失波的频率与入射光线的频率相同，其强度随临界面的垂直距离呈指数衰减：; 由于隐失波仅在界面上极薄的一层范围内传播，所以利用隐失波照明样品，可以仅激发厚度大约 100nm 内的荧光团，而更深层溶液中的荧光基团不会被激发，因此极大地提高了显微成像的对比度和信噪比。; 隐失波的渗透深度d12是入射角及相对折射率的函数。 d12是渗透深度,它等于从分界面处到光强衰减到分界面处数值l/ e的处的距离。对于可见光波长而言，浸透深度约为100 nm。; 隐失波