雌激素对成骨细胞凋亡及相关因素表达影响的实验分析.docx

雌激素对成骨细胞凋亡及相关因素表达影响的实验研究研究生：唐孝明 雌激素对成骨细胞凋亡及相关因素表达影响的实验研究 研究生：唐孝明 导师：裴福兴教授 摘 要 目的：探讨雌激素对体外培养的大鼠成骨细胞凋亡和凋亡相关基因 Bcl一2、Bax和Fas表达的影响，为明确雌激素治疗骨质疏松的机理提 供依据。 方法：(1)体外培养新生sD大鼠颅骨成骨细胞，并从形态学、硷性磷 酸酶染色等方面予以鉴定。(2)取生长旺盛的第2．3代成骨细胞随机分 为对照组、血清饥饿组、血清饥饿+雌激素组、脂多糖组和脂多糖+雌激 素组等5组，每组细胞分别培养24、48、72小时、5天、7天、14天 后作检测。(3)上述5组细胞培养72小时后作吖啶橙染色、TUNEL染 色观察凋亡细胞的形态特征。(4)流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率， 并比较组间的差异性。(5)免疫组化方法检查各组细胞凋亡相关基因 Bcl一2、Bax和Fas的表达情况，比较组间各基因表达的差异性。 结果：(1)培养出来的细胞具有成骨细胞的形态特征，硷性磷酸酶染色 为阳性。(2)吖啶橙染色荧光显微镜观察，血清饥饿和脂多糖组细胞见 细胞核呈黄绿色浓染、并可见凋亡小体，血清饥饿+雌激素组和脂多糖 组+雌激素组细胞正常。(3)TUNEL染色见血清饥饿和脂多糖组细胞核 内有紫兰色颗粒的凋亡细胞，而血清饥饿+雌激素组和脂多糖组+雌激素 组该类细胞明显减少。(4)流式细