基因工程原理第7章.pptVIP

第七章  动物细胞基因操作 第一节 动物细胞DNA转移技术 动物细胞基因转移的途径=转基因技术 直接DNA转移：外源DNA通过物理转化直接进入细胞 如显微注射、含DNA颗粒轰击、 转染：化学转染技术、脂质体、电穿孔 转导：通过动物病毒包裹，利用病毒可以自然感染细胞并将自身核酸分子转入细胞的能力。 转染技术 化学转染技术(利用胞吞作用) 1) DNA/磷酸钙共沉淀法 适用于单层生长细胞，不适用于悬浮或成团生长的细胞 对某些细胞有毒性，难以转染 2) 二乙氨乙基葡聚糖(DEAE-dextran) 可溶性聚阳离子制剂，不能用于形成稳定的细胞系 脂质体(利用胞吞作用) 低毒性，易操作，效率高，适用细胞类型多，甚至可转染活体细胞 电穿孔(利用电脉冲在细胞膜上形成瞬时的纳米大小的孔） 转移后DNA的命运 具备在宿主细胞内发挥功能的复制起始子，可以稳定复制(稳定转染) 可以整合到基因组DNA上，稳定复制(稳定转染) 不具备在宿主细胞内发挥功能，也没有整合到基因组DNA上，瞬时保留(瞬时转染） DNA转入细胞的效率远高于DNA整合的效率 两个物理上不相连的基因可以发生共转染，甚至可以都整合到基因组DNA上 第二节  动物细胞载体 动物细胞载体 非复制型载体 瞬时转染的载体(启动子功能分析的载体) 选择标记DNA 带有病毒复制子