第4节 毛细管电泳法.ppt

4.3.2、毛细管电泳的进样方式 进样量：毛细管长度的1%-2%；纳升级、非常小； 1. 流体力学进样方式 （1）进样端加压 （2）出口端抽真空 （3）虹吸进样 * 毛细管一端插入样品瓶，加电压； 2. 电动进样方式 进样不均：电歧视现象，淌度大的离子比淌度小的进样量大； 离子丢失：淌度大且与电渗流方向相反的离子可能进不去； 特别适合黏度大的试样； * 4.4、毛细管电泳分离模式 4.4.1、毛细管区带电泳 capillary zone electrophoresis，CZE 带电粒子的迁移速度=电泳和电渗流速度的矢量和。 正离子：两种效应的运动方向一致，在负极最先流出； 中性粒子：无电泳现象，受电渗流影响，在阳离子后流出； 阴离子：两种效应的运动方向相反；ν电渗流 ν电泳时,阴离子在负极最后流出,在这种情况下,不但可以按类分离,同种类离子由于差速迁移被相互分离。 最基本、应用最广的分离模式； * 1. 缓冲溶液中加入离子型表面活性剂，其浓度达到临界浓度，形成一疏水内核、外部带电的胶束。 4.4.2、胶束电动毛细管色谱 micellar electrokinetic chromatography，MEKC 在电场力的作用下，胶束在柱中移动。 加入十二烷基磺酸钠 * 2. 电泳流和电渗流的方向相反，且ν电渗流 ν电泳 ，负电胶束以较慢的速度向负极移动； 5. 色谱与电泳分离模式的结合。 3. 中性分子在胶束相和溶液（水相）间分配，疏水性强的组分与胶束结合的较牢，流出时间长； 4. 可用来分离中性物质，扩展了高效毛细管电泳的应用范围； * 4.4.3、毛细管凝胶电泳 capillary gel electrophoresis，CGE 将聚丙烯酰胺等在毛细管柱内交联生成凝胶。 其具有多孔性，类似分子筛的作用，试样分子按大小分离。能够有效减小组分扩散，所得峰型尖锐，分离效率高。 蛋白质、DNA等的电荷/质量比与分子大小无关，CZE模式很难分离，采用CGE能获得良好分离。 采用芯片阵列技术，为完成人类DNA基因测序，CGE作出了极大的贡献。 * 在毛细管壁上键合或涂渍高效液相色谱的固定液，以电渗流为驱动力，试样组分在两相间的分配为分离机理的电动色谱过程。 4.4.4、毛细管电色谱 capillary electroosmostic chromatography ，CEC 填充柱的基本结构 1 入口柱塞; 2 填充部分; 3 出口柱塞; 4 检测窗口; 5 开管部分 * 4.5、毛细管电泳应用 一、离子分析 二、药物分析 三、手性化合物分析 四、氨基酸分析 五、核酸分析及DNA测序 六、蛋白质分析 * 毛细管区带电泳分离30种阴离子电泳图 * * * * 美国实行从1990年开始的为期5年耗资30亿美元的人类基因组计划（HUGP），要求完成人类基因组的全部DNA（脱氧核糖核酸）测序，定位和遗传学研究。首先面临的问题四提供DNA大片段分子的分子量测定范围及其精度——解决基因测序的基础。HUGP需要高灵敏度，快速，低耗DNA测定方法。据原推算100台自动测序仪同时工作需耗时300年时间。为此，HUGP强化制定新的5年计划（1994-1998），把主要经费用于研究及开发DNA序列分析，从而促进生产新的DNA测序方法和技术，是测序速度提高百倍以上， 第4节 毛细管电泳 4.1、概述 4.2、理论基础 4.3、毛细管电泳仪 4.4、毛细管电泳分离模式 4.5、毛细管电泳应用 * 4.1、概述 在电解质溶液中，位于电场中的带电离子在电场力的作用下，以不同的速度向其所带电荷相反的电极方向迁移的现象，称之为电泳。由于不同离子所带电荷及性质的不同，迁移速率不同，可实现分离。样品的迁移速度和方向由其电荷和淌度决定。 1937年，Tiselius(瑞典)将蛋白质混合液放在两段缓冲溶液之间，两端施以电压进行自由溶液电泳，第一次将人血清提取的蛋白质混合液分离出白蛋白和α、β、γ球蛋白；1948年，获诺贝尔化学奖； * 利用电泳现象对化学或生物物质进行分离分析的方法和技术叫电泳法或电泳技术。 按形状分类：U型管电泳、柱状电泳、板电泳； 按载体分类：滤纸电泳、琼脂电泳、聚丙烯酰胺电泳、自由电泳； 传统电泳分析：操作烦琐，所用分离柱的柱径大，柱较短，分离效率不高（远低于HPLC），温度影响大。 4.1.1、经典的电泳分析方法 *