发酵过程优化与控制(第五章、丙酮酸发酵).ppt

* * 主要内容： 一、丙酮酸发酵概述 二、营养条件对光滑球拟酵母WSH-IP12生产丙酮酸的影响 三、维生素在丙酮酸过量合成中的重要作用 四、丙酮酸分批发酵的供氧控制模型 第一节 丙酮酸发酵概述 一、发酵生产丙酮酸方法 包括两类方法：直接发酵法，即微生物在生长过程中直接利用碳源积累丙酮酸；休止细胞法，即微生物细胞先生长，再转化底物为丙酮酸。 两种方法的区别:前者是利用微生物细胞的一系列酶完成由底物（如葡萄糖）生成丙酮酸的转化过程；后者是利用微生物中某一具有特定功能的酶完成由底物（如乳酸）向丙酮酸的转化。 具体包括如下4种方法： 1、酵母直接发酵生产丙酮酸 常用的酵母有球拟酵母、嗜盐酵母、假丝酵母、得巴利酵母等，其中球拟酵母属菌株，特别是烟酸、硫胺素、吡哆醇和生物素4种维生素的营养缺陷型T.glabrata IFO 0005是发酵法生产丙酮酸的首选菌株。 葡萄糖 丙酮酸 氨基酸 乙酰辅酶A 柠檬酸 草酰乙酸 乙醇 TCA循环 Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ 硫胺素 硫胺素 烟酸 生物素 吡哆醇 Ⅰ：丙酮酸脱羧酶（PDC） Ⅱ：转氨酶（PT） Ⅲ：丙酮酸羧化酶（PC） Ⅳ：丙酮酸脱氢酶系（PDH） 图5-1 光滑球拟酵母中丙酮酸代谢途径 嗜盐酵母能在含盐量高达80g/L的葡萄糖培养基中积累丙酮酸，产率很低。但能以无机铵盐为唯一氮源。 2、细菌或放线菌直接发酵生产丙酮酸 酵母菌积累丙酮酸一般都以葡萄糖为底物，而细菌积累丙酮酸时所能利用的底物种类更多一些，如葡萄糖、葡萄糖酸、丙二醇、丙酸等。由于产量低，目前还处于实验室研究阶段。 细菌发酵生产丙酮酸时由于培养基的pH在7.0甚至更高的特点，有利于构建一个发酵法生产丙酮酸-酶法合成色氨酸的耦合系统。 3、休止细胞法生产丙酮酸： 培养时间可以显著缩短，但操作比较烦琐，需要先培养细胞，再分离细胞，洗涤，最后才用于合成丙酮酸。 4、完整细胞/酶法生产丙酮酸： 还未见工业化成功的报道。 二、发酵法生产丙酮酸研究中存在的问题 通过分析文献报道，发现存在如下问题： 1、大多数T.glabrata菌株均以聚蛋白胨或蛋白胨为氮源。T.glabrata IFO 0005在只有聚蛋白胨而不添加维生素的种子培养基上照样生长良好的实验结果表明聚蛋白胨中所含有的维生素足以满足多重维生素营养缺陷型菌株的生长。在这种情况下分析该菌株所不能合成的维生素在代谢途径中的作用显然无法得出明确的结论，也不可能使丙酮酸产率达到很高的水平。 2、由于培养基中四种维生素的水平直接影响PDC（丙酮酸脱羧酶）、PHD（丙酮酸脱氢酶系）、PC（丙酮酸羧化酶）和PT（转氨酶）的活性，仅仅通过单因素实验很难分析出烟酸、硫胺素、吡哆醇和生物素各自在丙酮酸过量合成中的作用，也就谈不上合理优化策略的确定。 3、已有报道认为较高的溶氧有利于丙酮酸的积累，但溶氧要高到什么程度，应当怎样控制等具体问题并没有定论。此外，如果把生物素作为主要因素，溶氧作为次要因素，这两种因素组合起来会对丙酮酸发酵过程产生什么影响也未有报道。 4、培养基优化是高产丙酮酸的基础。关于营养条件特别是3种最主要的营养元素（C、H、P）的影响未有详尽报道。如葡萄糖对菌体生长和产酸是否存在抑制？是否有可能先培养细胞，待氮源耗尽后，细胞再转向大量积累丙酮酸？无机磷是EMP途径的必须元素，在丙酮酸生产中又起到什么样的作用？ 从过程优化的观点出发，对丙酮酸这样一个特殊的代谢中间体，其优化方法应当是在透彻分析球拟酵母发酵生产丙酮酸的生理学本质的基础上，采取一系列控制策略实现丙酮酸的过量合成。 第二节、营养条件对WSH-IP12生产丙酮酸的影响 具有代表性的丙酮酸高产菌株有两种：一种是带有多种遗传标记的Torulopsis glabrata，另一种是能量代谢被削弱的Escherichia coli。 本节介绍营养条件对 T. glabrata WSH-IP12发酵生产丙酮酸的影响。 一、酵母粉浓度对丙酮酸发酵的影响 酵母粉是一种常用的氮源和生长因子的来源，但“随着发酵培养基中酵母粉浓度的增大，细胞干重不断增大而丙酮酸产量却迅速降低”实验结果表明酵母粉不适合研究菌株发酵生产丙酮酸（图5-2）。 二、蛋白胨浓度对丙酮酸发酵的影响 实验结果（图5-3）表明：初始葡萄糖浓度为80g/L，当培养基中蛋白胨浓度为15g/L时，丙酮酸产量较高，低于1