第9章分子育种.pptVIP

第九章 分子育种 2009年12月 第十章 植物新品种登录、审定与保护 2009年12月 * * 第一节 基因工程 一、植物基因工程的概念及其研究概况 概念：运用分子生物学技术，根据育种目标，将不同生物的DNA在体外经酶切和连接，构成重组DNA分子，然后通过载体或直接导入受体细胞，使外源基因在受体细胞中得到复制和表达，最后从转化细胞中筛选有价值的类型并培育出工程植株，从而创造新品种的定向育种新技术。 二、植物基因工程的一般程序和方法 （一）目的基因的分离与克隆 1、鸟枪法 2、mRNA分离（逆转录法） 3、插入突变技术（转座子标签法 T-DNA标签法） （二）植物表达载体的构建 （三）植物的遗传转化 1、农杆菌介导转化 （1）单感染法 （2）共感染法 （3）叶盘法 2、DNA的理化转移方法 （1）化学刺激质粒进入原生质体 （2）电融合法 （3）微注射 （4）基因枪法 3、种质系统转化 （1）花粉管通道法 （2）子房、胚囊注射法 （3）生殖细胞浸泡法 基因枪 （四）转基因植株的检测与鉴定 1、要求有严格的对照（包括阳性和阴性对照） 2、转化当代要提供外源基因整合和表达的分子生物学证据与表现型数据（Southern杂交、Northern杂交、Western杂交、酶活性）