不同生姜提取物的.pptVIP

前人对生姜的药理生理活性已研究的比较多，生姜能维持抗氧化酶系(SOD、过氧化氢酶、GSH过氧化物酶)的活性，显著降低大鼠的脂质过氧化反应，降低血液中丙二醛（MDA）含量从而具有抗氧化活性。生姜还含有较多的挥发油，可以抑制人体对胆固醇的吸收，防止肝脏和血清胆固醇的蓄积。 预防和控制癌症的发生和进展一直是全世界积极探索的课题。前人研究的生姜抗肿瘤原理有抑制肿瘤组织中血管的生成作用、通过免疫调节抗肿瘤、对癌细胞转移的影响、通过细胞毒作用抗肿瘤等。抗肿瘤作用研究相对较少，研究时间也相对较短。至今没有人用MTT法从对肿瘤细胞毒性的方面对生姜粗提物的抗肿瘤活性进行研究。 试验内容 制备生姜提取物 急性毒性试验 细胞毒性试验 抗肿瘤试验 生 姜 提 取 物 的 制 备 生姜水提物和生姜醇提物浓度 试验中的关键技术 动物实验的灌胃技术 细胞培养技术 试 验 方 法 急性毒性试验 急性毒性试验选取健康小鼠60只，每组10只，为雄性空白对照组、雄性水提组、雄性醇提组、雌性空白对照组、雌性生姜水提组和雌性生姜醇提组。 采用小鼠经口灌胃，按体重给药，0.2ml/10g，灌胃两次。 基于MTT法的细胞试验 试 验 结 果 灌胃后性别对小鼠长势的影响 灌胃后提取方法对小鼠长势的影响 加入生理盐水的阴性对照组细胞的状态 不同剂量的生姜水提物作用后细胞的生长状态 不同剂量的生姜醇提物作用后细胞的生长状态 抗肿瘤试验浓度设置及实验结果 不同浓度生姜提取物对BEL-7404抑制作用 提取物对人正常细胞和肿瘤细胞抑制率的比较 结 论 本论文首先制备了生姜提取物，并考查了前人没有研究过的生姜提取物的急性毒性、细胞毒性以及粗提物的抗肿瘤活性。 两种提取物的浓度以姜粉计算，急性毒性试验中为1.66g/ml，细胞相关实验为1g/ml。 制备好提取物后我们将进行一系列试验，试验中的关键技术有动物实验中的灌胃技术，和包括细胞复苏、传代培养和细胞冻存的细胞培养技术，细胞培养应特别注意无菌操作，避免污染。 急性毒性试验我们依据国标中食品安全性毒理学评价程序和方法进行最大耐受量试验。细胞毒性试验以及抗肿瘤试验我们用的是MTT法。 在急性毒性试验中，灌胃一周后，小鼠无中毒和死亡现象，通过分析灌胃一周后体重增长的数值，我们可以看到：空白组之间差异不显著，雄性组与雌性组间的差异也不显著（P＞0.01），但是与对应的空白组之间的差异显著。 提组与空白对照组之间差异显著，醇提组与空白对照组之间差异显著，即两种提取物均对小鼠的长势有促进作用 在细胞毒性试验中以10为底0.5的对数为组距，两种提取物均设置六个剂量组，作用于人正常肝细胞系。 发现加入生理盐水的阴性对照组的细胞生长状态良好，结构清晰，边缘整齐，细胞外围有光晕，折光性好。 这是倒置显微镜下观察到的不同剂量的生姜水提物作用后细胞的生长状态 这是醇提物。与阴性对照组相比较，两种提取物的高浓度组1g/ml和0.316g/ml中的大多数细胞，已没有清晰的细胞结构，变得透明。这与测得的OD值结果一致 但是低浓度组的细胞状态与阴性对照组相似，毒性很小，低于0.1g/ml的抑制率小于5.63% 在抗肿瘤试验中环磷酰胺组为阳性对照组，纯肿瘤细胞组为阴性对照组。环磷酰胺是一种目前广为应用的抗癌药物，本实验中的浓度为患者日注射环磷酰胺体内血液中的浓度，OD值越高说明肿瘤细胞活性越强，OD值越低说明肿瘤细胞被杀死的越多，该组别抑制肿瘤效果越明显。 从试验结果中可以看出以两肿瘤细胞系为试验载体，不管是生姜水提物还是醇提物，所有试验组的OD值均小于相应的纯肿瘤细胞组。 对于BEL-7404肿瘤细胞系，有水提一组，醇提一组，和醇提二组三个实验组的抑制效果好与环磷酰胺组。 而生姜提取物对SMMC的抑制效果比BEL还要略好一些，有四个实验组的抑制效果好于环磷酰胺 通过与细胞毒性试验中生姜提取物对正常细胞的抑制率比较，发现0.1g/ml和0.01g/ml浓度的生姜提取物，对正常细胞的抑制率均远远小于对肿瘤细胞的抑制率。如0.1g/ml的生姜水提物对人肝癌细胞BEL-7404的抑制率达到68.46%，对SMMC-7721则达到了92.71%，而对人正常肝细胞却仅仅为4.16%。 * * * 申请答辩人：黄玉艾 指导教师：卢静 2009年6月5日 内 容 试验结果及结论 试验方法 试验中的关键技术 生姜提取物的制备 背景介绍 生姜 生姜中某些有效成分抗癌作用研究进展 鲜姜 干燥 切片 Text 姜粉 急性毒性试验 7.12% 7.67% 细胞相关试验 姜粉的制备 姜粉 50℃水浴3h 生姜醇提物