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黄原胶生产工艺 黄原胶是由D 一葡萄糖、D 一甘露糖、D 一葡萄糖醛酸、乙酸和丙酮酸组成“五糖重复单元”, 结构聚合体, 分子摩尔比为28 : 3 : 2 : 17: 0 .5 1 一0. 63 。黄原胶分子一级结构由p 一1, 4 键连接的D 一葡萄糖基主链与三糖单位侧链组成, 其侧链由D 一甘露糖和D 一葡萄糖醛酸交替连接而成。黄原胶分子侧末端含有丙酮酸, 其含量对黄原胶性能有很大影响, 在不同溶氧条件下发酵所得黄原胶, 其丙酮酸含量有明显差异。一般,溶氧速率小, 其丙酮酸含量低 生产工艺 工艺流程为: 菌种 摇瓶 扩大培养 发酵罐发酵 提取 干燥 粉碎 成品包装 1. 1 生产菌株 黄原胶生产菌株为黄单抱菌属几个种, 目前工业化生产用菌株主要是甘蓝黑腐病黄单孢杆菌(亦名野油菜黄单胞菌) , 直杆状,宽0. 4 林n l ~ 0. 7 林m ,有单个鞭毛, 可移动,革兰氏阴性, 好氧。19 61 年Je an e S 等首先从甘蓝黑腐病斑中分离出甘蓝黑腐病黄单抱杆菌, 赵大建等在19 8 6 年也得到编号为N . K 一01 甘蓝黑腐病黄单抱杆菌。此外, 菜豆黄单胞菌 、锦葵黄单胞菌和胡萝卜黄单胞菌 亦可作为发酵菌种。 1. 2 培养基组成及优化 1.2.1 培养基 固体培养基：蔗糖2g，蛋白胨0.5g，酵母粉0.2g，琼脂2g，水100mL。 种子培养基：蔗糖2g，蛋白胨0.5g，酵母粉0.2g，水100mL。 发酵培养液：蔗糖5g，蛋白胨0.5g，0.3g，碳酸钙0.3g，磷酸二氢钾0.5g，硫酸镁0.25g， 硫酸亚铁0.025g，柠檬酸0.025g，水100mL。 1.3 试验方法 1.3.1 平皿培养 取Φ9cm的培养皿，倒入25mL固体培养基，30℃培养4d~8d。 1.3.2 啤酒糟处理 啤酒糟（取自江苏食品职业技术学院啤酒实训中心）用自来水洗涤2次，烘干后备用。 1.3.3 发酵条件研究 培养基组成的研究：分别以葡萄糖、麦芽糖、乳糖和淀粉代替发酵培养基中的碳源，进行发酵培养，并做空白对照，确定最佳的碳源。在发酵培养基中加入0.5%氮源，即蛋白胨、酵母粉、硝酸铵、硫酸铵，乙酸铵和黄豆饼粉进行发酵培养，确定最佳的氮源。基质含水率的研究：称取10g啤酒糟，加入10mL、15mL、20mL、30mL、40mL的液体培养基搅拌均匀，搅匀后的固态培养基转入250mL三角瓶中，121℃灭菌15min，接种后进行培养。 1.4 菌体和多糖的检测 1.4.1 平皿培养液菌体和黄原胶含量的检测在平皿培养的粘液用铲子铲起，不要刮破琼脂表面。用蒸馏水稀释后，在25000g×条件下超速离心20min。细胞沉淀用蒸馏水冲洗2次，70℃干燥至恒定重量。上清液加入2倍体积的酒精，室温条件下搅拌30min，然后过滤掉酒精，再加入1倍体积的酒精搅拌过滤，得到黄原胶置于烘箱中，60℃烘干至恒重。 1.4.2 固态发酵中黄原胶含量的检测 向固态发酵物中加5倍体积的蒸馏水，250r/min振荡2h后，在4000g×条件下离心10min，然后在25000×g条件下超速离心20min。黄原胶的沉淀干燥同1.4.1所述。 2 结果与分析 2.1 琼脂表面培养结果 在实验中，琼脂表面培养野油菜黄单胞菌被用于评估固态发酵在胞外多糖的生产上的潜力。琼脂表面形成的粘液用于检测黄原胶和细胞的产量。琼脂平皿上黄原胶产量随蔗糖浓度和培养时间变化见表1。4d后细胞生长几乎完全停止，而黄原胶的产量持续增长。高糖浓度对细胞生长和聚合物合成有明显抑制作用。黄原胶占粘液的比例几乎是常数，培养时间和培养基中糖浓度对其影响不大，为3%~3.5%。这种情况表明，在饱和条件下，黄原胶分子粘液中的浓度不超过35g/L。这可能也表明固态发酵生产黄原胶的产量。琼脂平皿培养的pH值变化不大。这可能就是固态发酵生产有利地方，毕竟pH值控制是不容易实现的。 2.2 碳源和氮源对黄原胶产量的影响 碳源和氮源对细菌产黄原胶影响显著，不同的碳源（包括葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖和淀粉）对黄原胶产量的影响见图1。由图1可见，蔗糖和葡萄糖被证明是最适合生产黄原胶的碳源，考虑蔗糖为碳源时产量优于葡萄糖，选择蔗糖为碳源进行碳源浓度实验，结果见图2。随着蔗糖浓度的增加，黄原胶产量也随之提高，蔗糖浓度为80g/L时，黄原胶的产量达43.5g/L，转化率为54.4%；但当蔗糖浓度为50g/L时，黄原胶的产量达36.5g/L，转化率为73%。即高浓度的蔗糖时转化率下降，选择蔗糖的浓度为50g/L。 不同氮源对黄原胶产量的影响见图3。由图3可见，酵母粉和黄豆饼粉是最适合生产黄原胶的氮源，从工业生产角度看，黄豆饼粉比酵母粉便宜，选