血清高密度脂蛋白胆固醇免疫抑制酶试剂测定法.doc

血清高密度脂蛋白胆固醇免疫抑制酶试剂测定法 实验原理 以往高密度脂蛋白胆固醇的测定采用沉淀法[3]。 本试剂盒采用第三代均相法，不必离心步骤即可检测高密度脂蛋白胆固醇。使用抗人脂蛋白抗体与低密度脂蛋白(LDL)、极低密度脂蛋白(VLDL)和乳糜微粒形成抗原抗体复合物，只有剩下的高密度脂蛋白胆固醇可以被胆固醇酶法试剂检测[4]。 抗人? 抗人?-脂蛋白抗体 CHE?CHOHDL-C+H2O+O2 Δ4-胆甾烯酮+脂肪酸+ H2 CHE?CHO PODH2O2 + F-DAOS + 4-氨基安替比林 蓝色复合物+ H2O POD 注：F-DAOS为N-乙基-N-(2-羟基-3-丙磺基)-3,5-二甲氧基-4-氟苯胺 2. 标本： 2.1 病人准备：12小时禁食。 2.2 类型：血清，肝素抗凝血浆。 3. 标本存放：稳定性：4～6℃保存可稳定4天；-20℃保存至少可稳定2周。 4. 标本运输：常温条件下保存运输。 5. 标本拒收标准：细菌污染的标本。 6. 实验材料 6.1 试剂 威特曼HDL-C测定试剂盒 试剂1 ＋试剂2 6.1.1 试剂准备：试剂为即用式。 6.1.2 试剂稳定性与贮存：试剂保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。试剂不可冰冻。开盖后放于仪器的冰箱中可以稳定30天。 6.1.3 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。 6.1.4 注意事项：试剂中含叠氮钠（0.95g/L）为防腐剂。不可入口！避免接触皮肤及粘膜。应采取必要的预防措施使用试剂 6.2 校准品：使用威特曼公司提供的HDL/LDL校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。 6.3 质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。 7. 仪器：奥林巴斯AU2700生化分析仪 8. 操作步骤 8.1 项目基本参数：参见AU2700生化分析仪项目测定参数.SOP文件 8.2 仪器操作步骤：参见AU2700生化分析仪操作规程.SOP文件 9. 检验结果的判断与分析 10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则参见室内质控操作规程.SOP文件。 11. 计算方法：以TruCal HDL/LDL校准品HDL-C校准值校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果。 12. 参考值范围[5]：?0.9mmol/L。 参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。 13. 临床意义[1,2]：胆固醇由体细胞合成和来自对食物的吸收[1]，是细胞膜的组分和类固醇激素、胆汁酸的前体。血液中的脂蛋白是脂肪和载脂蛋白的复合物，由它转运胆固醇。脂蛋白有四种形式：高密度脂蛋白（HDL），低密度脂蛋白（LDL），极低密度脂蛋白（VLDL）和乳糜微粒。LDL参与将胆固醇运送至外周细胞，而HDL负责从细胞中吸收胆固醇。四种形式的脂蛋白与冠状动脉粥样硬化有着明确的关系。低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）作用于动脉内膜形成动脉粥样硬化斑块，与冠心病(CHD)以及相关的死亡率有着非常密切的关系。即使总胆固醇在正常范围内，LDL-C浓度的升高也预示了高度危险。HDL-C 具有抵御斑块形成的作用，它与冠心病的发生呈负相关。事实上，低HDL-C值是独立的危险因子。进行个体总胆固醇的检测只是起过筛作用，如果要对危险作较好的评估，必须另外进行HDL-C和LDL-C检测。 近年来，通过控制饮食、改变生活方式的治疗、和/或使用各种药物治疗(特别他汀类药物[HMG CoA还原酶抑制剂])临床试验，说明了降低总胆固醇和LDL-C水平可极大地减少CHD的危险。 流行病学研究观测到男性HDL-C浓度小于0.9mmol/L、女性小于1.0mmol/L，又出现空腹甘油三酯浓度大于2mmol/L时，预示冠心病的高度危险[2]。 14. 操作性能 14.1 线性范围：0.03～4.7mmol/L 14.2 精密度：精密度的评估是根据NCCLS推荐的标准方法，AU2700批内精密度小于3%，总精密度小于3%。用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则。 批内精密度 n=20 (mmol/L) s (mmol/L) CV (%) 批间精密度 n=20 (mmol/L) s (mmol/L) CV (%) 样品1 0.53 0.004 0.81 样品1 1.14 0.021 1.88 样品2 1.45 0.010 0.73 样品3 3.23 0.026 0.82 14.3 方法学比较：本公司的试剂盒(