血清无机磷Pi磷钼酸法测定.doc

血清无机磷Pi磷钼酸法测定 1. 实验原理 磷钼酸紫外终点比色法。钼酸铵+硫酸+磷酸盐 磷钼酸络合物；该络合物在340nm有最大光吸收峰。在340nm的吸光度与标本中无机磷的浓度成正比 2. 标本采集 2.1 病人准备：无特殊要求。 2.2 类型：血清、肝素血浆或尿液。 3. 标本存放：血清/血浆稳定性：4～25℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定3个月。尿液稳定性：4～25℃在pH5保存可稳定2天；不可使用已被污染的标本。收集24h尿液时，应在收集瓶中加入10%（W/V）盐酸10ml，以防止磷酸盐沉淀。测定前尿液应用蒸馏水作1：20稀释，测定结果乘以21。 4. 标本运输：室温条件下运输 5. 标本拒收标准：细菌污染不能做测定。 6. 实验材料： 6.1奥林巴斯无机磷测定试剂盒 试剂1 试剂2 6.1.1 试剂准备：试剂为即用式。 6.1.2 试剂稳定性与贮存 试剂避光保存于2～25℃，若无污染，可稳定至失效期。试剂不可冰冻。开盖后应避免污染。 6.1.3 变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染，不能继续使用。 6.1.4 注意事项：试剂中含硫酸，如与皮肤及粘膜接触，请仔细地用大量水冲洗。应采取必要的预防措施使用试剂。 6.2 校准品：使用奥林巴斯公司提供的校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件 6.3 质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件 7. 仪器：奥林巴斯AU2700生化分析仪 8. 操作步骤 8.1 项目基本参数：参见AU2700生化分析仪项目测定参数.SOP文件 8.2 仪器操作步骤：参见AU2700生化分析仪操作规程.SOP文件 9. 检验结果的判断与分析 10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则参见室内质控操作规程.SOP文件。 11. 计算方法：以TruCal U复合校准品磷校准值校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果，以mmol/L报告。 12. 参考值范围 血清/血浆[1] 成人： 0.84～1.45mmol/L 儿童/青少年： 1～30天 1.25～2.50mmol/L 1～12个月 1.15～2.15mmol/L 1～3岁 1.00～1.95mmol/L 4～6岁 1.05～1.80mmol/L 7～9岁 0.95～1.75mmol/L 10～12岁 1.05～1.85mmol/L 13～15岁 0.95～1.65mmol/L 16～18岁 0.85～1.60mmol/L 尿液[3]： 12.9～42.0mmol/L （注：各实验室应有自己的参考范围。）参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。 13. 临床意义：无机磷在体内多数以磷酸盐形式存在，主要为骨骼的无机成分，但是在细胞中也以磷脂和核酸形式存在，如腺苷三磷酸（ATP）还参与体内的能量转换。血浆中的无机磷呈磷酸钙的形式，因此血浆无机磷的水平与钙水平息息相关。血清或尿液中无机磷的检测主要用于肾功能失调，骨骼和甲状旁腺疾病等的诊断。在肾功能衰竭、甲状旁腺功能减退、假性甲状旁腺功能减退以及骨骼和细胞内磷酸钙流失时，无机磷浓度上升。因吸收不良、甲状腺功能亢进和维生素D缺乏时，无机磷浓度下降。同时进行钙监测可获得更多的信息。 14. 操作性能 14.1 线性范围：0.23～4.84mmol/L。 14.2 精密度：重复性的评估是根据NCCLS推荐的标准方法，AU2700批内重复性小于3%，总不精密度小于3%。用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则。 批内精密度 n=20 (mmol/L) s (mmol/L) CV (%) 天间精密度 n=20 (mmol/L) s (mmol/L) CV (%) 样品1 1.43 0.026 1.87 样品1 1.40 0.042 2.99 样品2 2.72 0.023 0.85 样品2 2.65 0.087 3.32 样品3 3.49 0.042 1.20 样品3 3.42 0.100 2.95 14.3 方法学比较：本公司的试剂盒(y)与某商品化试剂盒(x)，同时对59个样品进行Pi检测，将检测结果作方法学比较，其统计结果如下：y=1.00x-0.045mmol/L；r=0.999。 14.4 灵敏度：本试剂的检