血清-谷氨酰转移酶(-GGT)速率法测定.doc

血清?-谷氨酰转移酶(?-GGT)速率法测定 1. 实验原理 GGT催化谷氨酰基转移给受体的反应。本法以?-谷氨酰-3-羧基-对硝基苯胺为底物，将底物上的谷氨酰基转移至受体双甘肽，生成对硝基苯胺和?-谷氨酰双甘肽。在405nm进行吸光度检测，吸光度升高的速率与标本中GGT活力成正比。 ?-谷氨酰-3-羧基-对硝基苯胺+ 双甘肽 GGT 对硝基苯胺 + ?-谷氨酰双甘肽 2. 标本： 2.1 病人准备：无特殊。 2.2 类型：血清或EDTA血浆。 3. 标本存放：室温可保存8小时；2～8℃可保存3天；-20℃保存至少可稳定1周。 4. 标本运输：常温条件下保存运输。 5. 标本拒收标准：细菌污染的标本。 6. 实验材料 6.1 试剂 奥林巴斯?-GGT测定试剂盒（试剂1试剂2） 6.1.1试剂准备：试剂为即用式。 6.1.2试剂稳定性与贮存：试剂保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。 6.1.3变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。 6.1.4注意事项：试剂中含叠氮钠（0.95g/L）为防腐剂。不可入口！避免接触皮肤及粘膜。应采取必要的预防措施使用试剂。 6.2 校准品：使用DiaSys公司提供的TruCal U校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。 6.3 质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。 7. 仪器：奥林巴斯AU2700生化分析仪 8. 操作步骤 8.1 项目基本参数：参见AU2700生化分析仪项目测定参数.SOP文件 8.2仪器操作步骤：参见AU2700生化分析仪操作规程.SOP文件 9. 检验结果的判断与分析 10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则参见室内质控操作规程.SOP文件。 11. 计算方法：以TruCal U复合校准品GGT校准值校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果。 不使用校准品进行GGT活力检测，可以直接使用ΔA/min均值乘以计算因子得到结果，但是这样所得结果的可靠性不如使用校准品。计算GGT 活力的计算因子见下表： ΔA/min×因子 = GGT活力 [U/L] 底物起始的反应（37℃） 样品起始的反应（37℃） 405nm 1421 1158 12. 参考值范围 [3、4]：女性7-32U/L；男性11-49U/L。 参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。 13. 临床意义[1]：?-谷氨酰转移酶（GGT）又称?-谷氨酰转肽酶。存在于肝脏和胆汁中，是肝胆疾病最敏感的指示物。因为该酶对肝胆疾病具有高阴性预期值，因此?-谷氨酰转移酶的检测被广泛地用于排除肝胆疾病。结合丙氨酸氨基转移酶、门冬氨酸氨基转移酶、胆碱酯酶等其它酶，?-谷氨酰转移酶对于肝脏疾病的鉴别诊断非常有价值。 14. 操作性能 14.1 线性范围：2-500U/L。 14.2 精密度：精密度的评估是根据NCCLS推荐的标准方法，AU2700批内精密度小于3%，总精密度小于3%。用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则。 批内精密度 n=20 (U/L) s (U/L) CV (%) 批间精密度 n=20 (U/L) s (U/L) CV (%) 样品1 39.9 0.99 2.48 样品1 41.5 0.62 1.49 样品2 73.6 0.85 1.16 样品2 72.3 0.61 0.85 样品3 206 1.32 0.64 样品3 204 0.74 0.36 14.3 方法学比较：本公司的试剂盒(y)与某商品化试剂盒(x)，同时对78个样品进行GGT活力检测，将检测结果作方法学比较，其统计结果如下：y=1.00x+1.00U/L；r=0.999。 14.4 灵敏度：本试剂的检测限为2U/L。 14.5 病人结果可报告范围：2-500U/L。 15. 超出范围结果处理：本法对GGT活力检测的最大500U/L，当样品测定值超过上限时，应将样品用9g/L氯化钠溶液作1+5稀释，重新测定，结果乘以6。 16. 病危报警值的处理 17. 方法局限性 17.1 本法对GGT活力检测的最大500U/L，当样品测定值超过上限时，应将样品用9g/L氯化钠溶液作1+5稀释，重新测定，结果乘6。 17.2 干扰物质：当样品中抗坏血酸浓度?1704?mol/L ，胆红素浓度? 684?mol/L，血红蛋白浓度?4.00g/L，甘油三酯浓度?22.6m