总大肠杆菌检测作业指导书.doc

总大肠杆菌检测作业指导书 1.培养基 1.1乳糖蛋白胨培养液； 1.2三倍乳糖蛋白胨培养液； 1.3品红亚硫酸钠培养基； 1.4伊红美蓝培养基。 2．步骤 2.1生活饮用水 2.1.1初发酵试验：在二个装有已灭菌的50ml三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液的大试管或烧瓶中，以无菌操作各加入已充分混匀的水样100ml；在10支装有已灭菌的5ml三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液的试管中（内有倒管），以无菌操作加入充分混匀的水样10ml，混匀后置于37℃恒温箱培养24h。 2.1.2平板分离：经初发酵试验培养24h后，发酵试管盐酸变黄为产酸，小玻璃倒管内有气泡为产气，将产酸产气及只产酸发酵管，分别用接种环划线接种于品红亚硫酸钠培养基上，置于37℃中培养18~24h，挑选符合下列特征的菌落，取菌落的一小部分进行涂片、革兰氏染色、镜检。 2.1.3复发酵试验：上述涂片镜检的菌落如为革兰氏阴性无芽孢的杆菌，则挑选该菌落的另一部分接种于普通浓度乳糖蛋白胨培养液中，每管可接种分离自同一初发酵管的最典型菌落1~3个，报告每升水样中的大肠菌群数。 2.2水源水 2.2.1将水样作1:10稀释； 2.2.2于各装有5ml三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液的五个试管中，各加10ml水样；于各装有10ml乳糖蛋白胨培养液的五个试管中，各加1ml水样；于各装有10ml乳糖蛋白胨培养液的五个试管中，各加入1ml 1:10稀释的水样。共计15管，三个稀释度，将各管充分混匀，置于37℃恒温箱培养24h。 2.2.3平板分离：经初发酵试验培养24h后，发酵试管盐酸变黄为产酸，小玻璃倒管内有气泡为产气，将产酸产气及只产酸发酵管，分别用接种环划线接种于品红亚硫酸钠培养基上，置于37℃中培养18~24h，挑选符合下列特征的菌落，取菌落的一小部分进行涂片、革兰氏染色、镜检。 2.2.4复发酵试验：上述涂片镜检的菌落如为革兰氏阴性无芽孢的杆菌，则挑选该菌落的另一部分接种于普通浓度乳糖蛋白胨培养液中，每管可接种分离自同一初发酵管的最典型菌落1~3个，报告每升水样中的大肠菌群数。 2.2.5根据证实总大肠菌群存在的阳性管数查表即求得每100ml水样中存在的总大肠菌群数。