血清乳酸脱氢酶DGKC推荐方法测定.doc

血清乳酸脱氢酶DGKC推荐方法测定 实验原理 德国临床化学学会(DGKC)推荐的连续监测法[3]。 LDHLDH催化乳酸氧化为丙酮酸，同时将NAD+还原为NADH，NADH的生成速率与标本中乳酸脱氢酶的活力成正比。 LDH L-乳酸 + NAD+ 丙酮酸 + NADH + H+ 2. 标本： 2.1 病人准备：无特殊。 2.2 类型：血清，肝素或EDTA血浆。 3. 标本存放：3天内的活性损失：2～8℃保存：8%；15～25℃保存：2%。 4. 标本运输：常温条件下保存运输。 5. 标本拒收标准：标本溶血、细菌污染的标本。 6. 实验材料 6.1 试剂 奥林巴斯LDH测定试剂盒 试剂1，试剂2 6.1.1试剂准备 试剂为即用式。 6.1.2 试剂稳定性与贮存：试剂保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。试剂不可冰冻。 6.1.3 变质指示 当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。 6.1.4 注意事项 试剂中含叠氮钠（0.95g/L）为防腐剂。不可入口！避免接触皮肤及粘膜。应采取必要的预防措施使用试剂。 6.2 校准品 使用奥林巴斯公司提供的校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。 6.3 质控品 具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。 7. 仪器：奥林巴斯AU2700生化分析仪 8. 操作步骤 8.1 项目基本参数：参见AU2700生化分析仪项目测定参数.SOP文件 8.2仪器操作步骤：参见AU2700生化分析仪操作规程.SOP文件 9. 检验结果的判断与分析 10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则参见室内质控操作规程.SOP文件。 11. 计算方法：以TruCal U复合校准品LDH校准值校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果。 不使用校准品进行LDH活力检测，可以直接使用ΔA/min均值乘以计算因子得到结果，但是这样所得结果的可靠性不如使用校准品。计算LDH活力的计算因子见下表： ΔA/min×因子 = LDH活力 [U/L] 底物起始的反应（37℃） 样品起始的反应（37℃） 340 nm 10080 8095 334 nm 10275 8250 365 nm 18765 15000 12. 参考值范围[1] [U/L] 女性 男性 成人： 135～215 135～225 儿童：1～30天 145～765 125～735 31天～1年 190～420 170～450 1～3岁 165～395 155～345 4～6岁 135～345 155～345 7～9岁 140～280 145～300 10～12岁 120～260 120～325 13～15岁 100～275 120～290 16～18岁 105～230 105～235 参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。 13. 临床意义[1,2]：乳酸脱氢酶（LDH）由五种不同的同工酶组成，催化L-乳酸与丙酮酸的相互转换。LDH存在于人体所有组织的细胞质中，在肝、心和骨骼肌中含量较高，在红细胞、胰腺、肾和胃中含量较低。在多种病理情况下出现LDH活力的升高，如心肌梗死、癌症、肝脏疾病、血液疾病或肌肉疾病。由于LDH缺乏器官特异性，因此在鉴别诊断时，有必要作LDH同工酶和其它酶类的测定，如碱性磷酸酶、丙氨酸氨基转移酶和天门冬氨酸氨基转移酶。 14. 操作性能 14.1 线性范围：5-1200U/L。 14.2 精密度：精密度的评估是根据NCCLS推荐的标准方法，AU2700批内精密度小于3%，总精密度小于3%。用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则。 批内 精密度 n=20 (U/L) s (U/L) CV (%) 批间 精密度 n=20 (U/L) s (U/L) CV (%) 样品1 178 2.00 1.12 样品1 170 1.62 0.95 样品2 187 2.12 1.14 样品2 176 2.48 1.41 样品3 566 2.27 0.40 样品