血清载脂蛋白B免疫透射比浊法测定法.doc

血清载脂蛋白B免疫透射比浊法测定法 1. 实验原理 免疫透射比浊终点测定法。使用抗Apo B抗体和样品中的Apo B进行抗原－抗体反应。反应完成后，用透射比浊法检测吸光度的变化反映Apo B浓度。 2. 标本： 2.1 病人准备：12小时禁食。 2.2 类型：血清、肝素或EDTA血浆。 3. 标本存放：稳定性：15～25℃保存可稳定5天；2～8℃保存可稳定2周；-20℃保存可稳定3个月；标本不可反复冻融。。 4. 标本运输：常温条件下保存运输。 5. 标本拒收标准：细菌污染的标本。 6. 实验材料 6.1 试剂 威特曼APO B测定试剂盒 试剂1；试剂2 6.1.1试剂准备：试剂为即用式。 6.1.2 试剂稳定性与贮存：试剂保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。试剂不可冰冻。 6.1.3 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。 6.1.4 注意事项：试剂中含叠氮钠（0.95 g/L）为防腐剂。不可入口！避免接触皮肤及粘膜。应采取必要的预防措施使用试剂 6.2 校准品：建议使用威特曼公司提供的校准品对自动分析仪进行校准，校准稳定期：4周。具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。 6.3 质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。 7. 仪器：奥林巴斯AU2700生化分析仪 8. 操作步骤 8.1 项目基本参数：参见AU2700生化分析仪项目测定参数.SOP文件 8.2仪器操作步骤：参见AU2700生化分析仪操作规程.SOP文件 9. 检验结果的判断与分析 10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则参见室内质控操作规程.SOP文件。 11. 计算方法：按照公司配套校准品使用要求，用3个不同水平的校准液，并以9g/L氯化钠溶液为空白，经校准测定，仪器自动对校准品响应量通过合适的数学模型如Logit/Log，拟合成校准曲线。校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果。 12 参考值范围 [3] 女性：0.75～1.50g/L 男性：0.80～1.55g/L 参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。 13. 临床意义[1,2]：载脂蛋白B(Apo B)是低密度脂蛋白(LDL)的主要结构蛋白，它输送胆固醇至细胞中，因此与动脉粥样硬化斑块形成有关。因为Apo B浓度水平与动脉粥样硬化程度密切相关，因此Apo B浓度水平的上升和冠心病(CHD)紧密有关。在使用总胆固醇和甘油三酯来过筛冠心病危险时，除检测脂蛋白(a)与载脂蛋白A1之外，同时检测载脂蛋白B能对各种脂蛋白代谢失调提供更多的信息，也可替代低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)检测。检测载脂蛋白B在监视降脂药物治疗时非常有用。一些研究表明，当Apo B浓度上升(女性Apo B1.50g/L，男性Apo B1.55g/L)，而Apo A1浓度下降(女性Apo A11.20g/L，男性Apo A11.10g/L)，对于预测CHD危险非常有用。 14. 操作性能 14.1 线性范围：0.01～2.50g/L。 14.2 精密度：精密度的评估是根据NCCLS推荐的标准方法，AU2700批内精密度小于3%，总精密度小于3%。用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则。 批内精密度 n=20 (g/L) s (g/L) CV (%) 天间精密度 n=20(每天校准) (g/L) s (g/L) CV (%) 样品1 0.242 0.0064 2.63 样品1 0.312 0.0074 2.38 样品2 0.952 0.0233 2.45 样品2 0.638 0.0118 1.84 样品3 1.56 0.0341 2.18 样品3 1.49 0.0516 3.46 天间精密度 n=20(一次校准) (g/L) s (g/L) CV (%) 样品1 0.254 0.0074 2.89 样品2 0.913 0.0233 2.55 样品3 1.58 0.0376 2.38 14.3 方法学比较：本公司的试剂盒(y)与某商品化试剂盒(x)，同时对63个样品进行Apo B检测，将检测结果作方法学比较，其统计结果如下：y=1.08x-0.0512g/L；r=0.990。 14.4 灵敏度：本试剂的检测限为0.003g/L。 14.5 病人结果可报告范围：0.01～2.50g/L 15. 超出范围结果处理：本法的检测范围为0.01～2.50g/L。当样品测定值超过上限时，应将样品用9g/L氯化钠溶液作1：1稀释后，重新测定，结果乘以2。