七聚合酶链式反应PCR技术.pptVIP

实验七 聚合酶链式反应（PCR）技术 1. 实验目的 2. 实验原理 3. 实验仪器、材料与试剂 4. 实验步骤 5. 实验结果与讨论 实验目的 掌握PCR反应的原理及技术。 实验原理 聚合酶链式反应（polymerase chain reaction）简称PCR技术，是一种体外扩增特异DNA片段的技术。 利用PCR技术可在短时间内获得数百万个特异的DNA序列的拷贝。PCR技术在分子克隆、遗传病的基因诊断等方面得到广泛的应用。 PCR技术实际上是在模板DNA、引物和4种脱氧核苷酸存在的条件下依赖于DNA聚合酶的酶促合成反应。 PCR技术的特异性取决于引物和模板DNA结合的特异性。 反应分为三步： 1.变性：在高温条件下，DNA双链解离形成单链DNA； 2.退火：当温度突然降低时引物与其互补的模板在局部形成杂交链； 3.延伸：在DNA聚合酶、dNTPs和Mg2+存在的条件下，聚合酶催化以引物为起始点的DNA链延伸反应。 以上三步为一个循环，每一循环的产物可以作为下一个循环的模板，几十个循环之后，介于两个引物之间的特异性DNA片段得到了大量复制，数量可达到~106~7个拷贝。 PCR技术的参数主要有7个： 聚合酶、引物、dNTPs、反应buffer、二价离子、模板、一价离子。 实验仪器、材料与试剂 （一）仪器 1. PCR仪 2. 台式离心机 3.