临床寄生虫学和寄生虫学检验(免疫学、分子生物学诊断).pptVIP

寄生虫感染的免疫学及分子生物学诊断技术 寄生虫感染的免疫学及分子生物学诊断技术 免疫学诊断技术 现有的多种免疫学检测技术均已被应用于寄生虫病的临床诊断或流行病学研究。本章仅介绍几种寄生虫病诊断特有的免疫检测技术 环卵沉淀试验 环卵沉淀试验(circumoval Precipitin test,COPT)由Oliver－Gonzalez(1954)最早用于曼氏血吸虫病的诊断,获得了较好的结果,阳性率达100％,假阳性率为8.3％。 国内亦于1958年开始应用该法诊断日本血吸虫病,取得了满意效果。目前COPT仍是国内诊断血吸虫病最常用的方法之一 环卵沉淀试验基本原理 基本原理:环卵沉淀试验为抗原机体反应的一种类型,属免疫沉淀反应。当成熟血吸虫卵内毛蚴的分泌、排泄物抗原经卵壳微孔透出壳外与血吸虫病患者血清中相应抗体结合后,在虫卵周围形成具有一定折光性的特异性的泡状、指状、带状或片状沉淀物,即为阳性反应 环卵沉淀试验基本原理 免疫沉淀物的形成取决于虫卵内分泌、排出物透过卵壳微孔的量,以及血吸虫病人血清中特异性抗体水平。在正常人血清中,因无相应的抗体存在,故虫卵周围不出现特异性沉淀物,即为阴性 环卵沉淀试验常用方法 常规COPT需用熔化的石蜡划蜡线、密封盖片,操作步骤繁琐,不易于标准化,因此现有了许多改进方法,例如: 塑料管法COPT:是应用聚乙烯塑料管(φ2mm)采集血样,分离血清,并在管内加入干卵孵育。该法操作简单、适于现场应用,但在大规模查病时难于达到标准化和操作规范化的要求。本法也具有很高的敏感性和特异性 双面胶纸条法环卵沉淀试验(DGS－COPT) 是将双面胶纸条制成特定的式样作COPT,省却常规法划蜡线、蜡封片等繁琐步骤,操作简单较规范,适于现场及临床使用。但该法仍需实验者临时加入虫卵，使其难于达到标准化 PVF抗原片法及血凝板法环卵沉淀试验 PVF抗原片法:以PVF膜为载体,将于卵用5％棉胶液粘附剂预置其上,试验时加入待检者血清即可,操作方法极其简便易行,且抗原片便于携带、邮寄、还可保存实验结果。由固定的实验人员统一滴加虫卵,使卵数较一致,易达标准化,适于现场应用。 血凝板法:将血清及干卵加入血凝板孔中省却了划蜡线的步骤。 组织内环卵沉淀反应 又称卵内沉淀反应(Intraoval precipitin reaction,IOP),是以血吸虫病鼠肝组织制成的石蜡切片为抗原与受检者血清作用后,如在虫卵内、卵黄膜与毛蚴之间或在毛蚴的表面出现泡状、指状或条带状有明显折光性的沉淀物即为阳性,其敏感性和特异性同常规法COPT试验无显著性差异 酶联环卵沉淀反应(enzyme－linked COPT,FLCOPT) 是环卵沉淀反应结合酶免疫测定技术的一种改进方法,其基本原理是先在酶标反应板中进行环卵沉淀试验,洗去待检血清后加入酶标记的羊抗人IgG孵育,经洗涤后加入联苯胺底物显色。如虫卵周围及虫卵内有棕色沉淀物即为阳性,反之则为阴性。该法具有高度的敏感性,特异性可达100％,平均环沉率显著高于常规COPT试验法,且总试验时间可缩短24小时出结果 环卵沉淀试验方法评价 COPT为血吸虫病所特有的免疫学诊断方法,具有较高的敏感性(94.1％～98.6％)和特异性(1.9％～3.6％)。主要用于： ①作为血吸虫病的辅助诊断及病原治疗的依据,对无血吸虫病史人群和距末次治疗3年以上的血吸虫病病人,若环沉率在3％或3％以上者,可结合临床表现给予治疗,目前多将此治疗标准降至1％的环沉率 环卵沉淀试验方法评价 ②作为血吸虫病血清流行病学调查及疫情监测的方法,在血吸虫病流行区,COPT环沉率的消长情况,能反映感染人群血清特异性抗体水平的动态变化,用以了解疫情趋势,特别在达到传播控制和传播阴转标准的监测地区,可用作监测的方法之一 ③考核防治效果,经有效药物(吡喹酮)治疗后1年病人COPT阴转率达 27.1％,治后2年阴转率40％以上,治后4年病人血清COPT的阴转率80％以上 适用范围 加吸虫病的辅助诊断、疗效考核、流行病学调查及疫情监测 免疫酶染色试验 免疫酶技术主要是利用免疫反应的高度特异性和酶促反应高效性的特点,在保持抗原抗体免疫活性和酶的催化活性的基础上,将酶标记于抗原或抗体之上,使特异性免疫反应同酶促反应相结合,从而使测定方法达到高度特异性和敏感性。免疫酶染色试验(immunoenzvmaticstaining test,IEST)是免疫酶检测技术的一种。Kamiya等 (1981)最早以组织内虫卵石蜡切片为抗原作IEST试验诊断日本血吸虫病,国内首先用微丝蚴固相抗原作IEST诊断丝虫病均取得满意结果 免疫酶染色试验基本原理 IEST是以寄生虫各个生活史时期(如成虫、幼虫、虫卵或原虫滋养体等)制成的切片或涂片作为固相抗原,与待测标